Стоматологический статус и особенности кристаллизации слюны у больных сахарным диабетом селифанова елена ивановна. Использование кристаллоскопии для выявления острого лейкоза у мышей линии AKR

А. К. Мартусевич

КРИСТАЛЛОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ: ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Кировская государственная медицинская академия (Науч. рук. - д. м. п., профессор Н. Ф. Камакин)

Кристаллизация биологических жидкостей организма - генетически обусловленный про цесс, связанный с наличием в них определенных органических и неорганических компонентов . Это достаточно любопытное их свойство до пос леднего времени оставалось без внимания. Лишь, начиная с 80-х годов, в литературе стали появляться подобные исследования . Они брали начало из работ Т. Е. Ловица , ко торые предложил два оригинальных метода ана лиза: «метод микрокристаллических реакций» и «выветренных солей». Они легли в основу буду щих экспериментов. Первоначально методики нашли применение в фармации , а затем и в судебной медицине . Значительно позже крис таллизация стала восприниматься как диагнос тический тест. В этом плане наибольший вклад внесли сотрудники Московского областного научно-исследовательского клинического институ та им. М. Ф. Владимирского. Ими была разра ботана методика кристаллоскопического анали за биологических субстратов, которая по сути представляла собой тезиграфический тест . По данному способу изучены уже сыворотка крови, моча, слюна, назальный секрет, ликвор, биопта- ты с различных органов, дуоденальное содержи мое и другие, однако эти исследования содержат определенные недостатки (отсутствие системно го подхода, привязка к конкретным условиям проведения диагностики, рассмотрение одного диагностического принципа и т. д.) .

Работы, посвященные исследованию биожид костей человека методом «классической» крис таллоскопии, встречаются в литературе доста точно редко . Причем их особенностью является использование для диагностики сыво ротки крови, что позволяет отнести такой спо соб применения к инвазивным.

В связи с таким разнообразием методических подходов необходимо систематизировать их и выяснить наиболее эффективные из них.

Целью исследования являлось выяснение применимости кристаллографических методов в отношении некоторых нормальных и патологи ческих состояний организма человека, а также изучение стандартных картин, полученных при подготовке микропрепаратов по способам «классической» кристаллографии и тезиграфии.

Материал и методы исследования

В качестве основного метода была примене на разработанная нами тезиокристаллография. Она включала в себя совместное использование «классической» кристаллографии и тезиграфии, что повышает информативность проводимого анализа. В качестве кристаллообразующего ве щества при тезиграфии использовался 0,9% ра створ №0. Материалом исследования были слюна, моча, слеза и пот 150 здоровых людей и сыворотка крови и моча 160 лиц с различной па тологией (бронхолегочные заболевания, нару шения пищеварительной и нервной системы). Высушивание микропрепаратов производилось модифицированнным ускоренным способом в токе теплого воздуха (при температуре 56,8+12,1°С; влажности 24,0±3,4%; время подго товки пробы в этих условиях составляло 0,24+0,03 часа). Объем наносимой биожидкости составлял 0,3+0,05 мл. Оценка полученных кри- сталлограмм и характеристика количественного и качественного состава образцов производи лась по идентификационной таблице. Подсчет структур и центров в целях повышения точнос ти исследования проводился в трех полях зре ния, причем в качестве диагностического прини малось среднее между ними округленное до це лого значение.

Для оценки данных тезиграфии вводился ко эффициент Q, отражающий соотношение коли чества центров кристаллизации в обоих образ цах: Q=A/B, где А - количество центров крис таллизации в экспериментальной пробе, В - ко личество центров кристаллизации, образовав шихся при высушивании стандартного раство ра. Именно с помощью данного коэффициента, по нашему мнению, станет возможным проведе ние диагностики и дифференциальной диагнос тики различных заболеваний. Кроме того, его использование позволяет нивелировать погреш ности от воздействий, связанных с условиями проведения лабораторной диагностики (темпе ратура в помещении, влажность, температура потока воздуха при сушке).

Полученные результаты и их обсуждение

Для интерпретации кристаллоскопических картин мы проклассифицировали все встречае мые нами кристаллические и аморфные образо вания (таблица № 1, схема). В соответствии с данной классификацией и проводилась оценка препаратов, подготовленных для анализа по ме тодике «классической» кристаллоскопии. Про изводилось как общее изучение кристаллоскопи ческих особенностей биожидкости, так и срав нительная их характеристика.

СТРАНИЧКА МОЛОДОГО УЧЕНОГО

Всем основным биожидкостям организма свойственно образование кристаллической кар

тины, отличающейся следующими особенностя ми. Высыхание капли слюны на смачиваемой поверхности (стекло) приводит к образованию 3 различных зон: наружная (маргинальная), обус ловленная мобильной составляющей слюны (вода, электролиты, низкомолекулярные соеди нения); внутренняя (центральная), структура ко торой соответствует коллоидной части слюны (в мукоиде сосредоточены высокомолекулярные белки, электролиты, низкомолекулярные соеди нения) и промежуточная, отличающаяся наи меньшей концентрацией веществ. Внутренняя зона может иметь выраженные и невыраженные границы. Часто к внешнему контуру внутренней границы примыкают кристаллические и аморф ные структуры.

Высыхание коллоида сопровождается его ретракцией, нарастанием концентрации низко молекулярных соединений и образованием кри сталлических структур самого разного вида.

Такое распределение составных частей био жидкостей наиболее характерно для слюны, дру гие же имеют свои индивидуальные особенности (таблица №2).

По представленным в таблице данным оче-, видно, что каждая из исследованных биожидко стей имеет свои особенности кристаллоскопи- ческой картины, что может быть объяснено вы ведением ими различных веществ. Так, наиболь шее общее количество кристаллов наблюдается в слюне и поте, однако качественное соотноше ние их варьирует. Если для слюны характерно значительное преобладание пластинчатых пря моугольников, то основные составляющие кар тины пота - пирамиды и октаэдры. Это свиде тельствует том, что роль в экскреции холестери на саливарного пути больше, чем его выделение с потом, в то время как выведение фосфатов кальция и магния выявляет обратную законо мерность. Возможно, данный факт объясняется большим количеством выделяемой слюны отно сительно объема экскретированного пота в спо койном состоянии у практически здоровых лиц. Выведение данным путем фосфатов может быть связано с нагрузкой, как физической, так и эмо циональной. Присутствующие в составе мочи октаэдры, являющиеся по химической природе фосфатом кальция, на наш взгляд, выполняют ту же функцию.

Дендритная картина биожидкостей в значи тельной степени дифференцирована. Соотноше ние данных структур, как и одиночные кристал лы, несет диагностическую нагрузку. Так, боль шое количество фигур «лук» и «комета», пред ставляющих собой оксалат кальция, указывает на совместную экскрецию с кальцием углекисло го газа, одного из терминальных метаболитов дыхательной цепи.

В отношении аморфных образований наблю дается различие в размерах частиц и их количе стве. Эти характеристики демонстрируют сте пень участия данного пути в экскреции углекис лого газа и кальция.

Кроме исследований, посвященных изучению кристаллоскопической картины у здоровых лю дей в спокойном состоянии, нами были проведе ны эксперименты по рассмотрению влияния фи зических и эмоциональных нагрузок на количе ство и качественный состав получаемых препа ратов. В результате данной группы опытов нами выделены следующие тенденции.

Для физической нагрузки было характерно кристаллоскопически значимое выделение ионов Са2+ и М^2+, фосфат-ионов, что в свою очередь дало отражение в образующейся кар тине. Соотношение данных ионов существенно зависело от уровня подготовленности испытуе мого.

В качестве примера возможного применения этих методик проиллюстрируем проведение ди агностики и дифференциальной диагностики на различных формах и стадиях панкреатита. Так, нами изучались кристаллические картины боль ных острым и хроническим панкреатитом, пан креатитом в период реконвалесценции. По обо им тестам имеет место дифференциация (табли ца № 3). При анализе полученных данных изуча лась также динамика изменения результатов кристаллоскопического теста в процессе разви тия и лечения заболевания (диаграмма).

В соответствии с вышеприведенной диаграм мой прослеживаются изменения соотношения и количества кристаллов в зависимости от формы и стадии заболевания. Таким образом, различия в кристаллоскопической картине указывают на возможность диагностики и дифференциальной диагностики панкреатита.

Из данной таблицы можно видеть, что на блюдаются значительные отличия по всем ос новным группам кристаллических и аморфных структур. Следовательно, метод «классической» кристаллоскопии дает достаточно оснований, чтобы с определенной степенью точности поста вить предварительный диагноз панкреатита, а также установить форму или стадию заболева ния. Кроме того, по изменениям кристаллоско пической картины, на наш взгляд, представляет ся возможным определить некоторые метаболи ческие сдвиги ионного гомеостаза в организме.

Тезиграфический тест дал следующие резуль таты (таблица № 4).

Очевидно, что тезиграфическое исследова ние, как и кристаллоскопическое, показывает зна чительные различия по используемому коэффици енту данных заболеваний. При этом дифференци ация по коэффициенту Q достаточно четкая, о чем свидетельствуют достоверные отличия между ними (р<0,01). Следовательно, анализируемый метод является подходящим в качестве быстро го и эффективного диагностического теста.

1.Организм человека можно представить как со вокупность кристаллоскопических картин его био жидкостей (слюны, мочи, сыворотки крови, слезы, пота, ликвора и других);

2.каждой биожидкости организма человека свой ственны определенные кристаллоскопические призна ки (наличие или отсутствие вышеуказанных струк тур);

3.физическое и эмоциональное напряжение могут менять кристаллоскопическую картину в сторону уве личения содержания компонентов, являющихся по химической природе фосфатами кальция и магния или карбонатом кальция;

4. выявлены характерные паттерны в отношении «классической» кристаллографии и тезиграфии для различных форм и

стадий панкреатита.

Литература

\. Я. 3. Ильясов. Судебно-медицинская эксперти за. - 1966. -№ 4. - С. 43.

2.Д. Б. Каликштейн, Л. А. Мороз, Н. Н. Квитко, Н. Е. Шмелева, Б. А. Павлов. Кристаллографическое исследование биологических субстратов // Клиничес кая медицина. - 1990. -№ 4. - С. 28-31.

3.Д. Б. Каликштейн, Л. А. Мороз, В. Л. Черняков. Значение тезиграфического метода исследования мочи // Лабораторное дело. - 1981. - № 2. - С. 79-81.

4.Кристаллоскопический метод исследования биологических субстратов: Метод, рекомендации / Л. А Мороз. И. Л. Теодор, В. Е. Брык и др. - М., 1981. -9 с.

5.Т. Е. Ловиц.Технол. журнал. - 1804. - Т. 1, № 3. -С. 27.

6.М. Н. Никольская. Аптечное дело. - 1961. - № 6. -С. 42.

7.М. Н. Никольская, В. Г. Гандель, В. А. Попков. Аптечное дело. - 1965. - № 4. - С. 63.

8.Г. В. Плаксина, Г. В. Римарчук, С. В. Бутенко, Л. Н. Горчакова. Клиническое значение кристалло графического и кристаллоскопического метода иссле дования мочи // Клиническая лабораторная диагнос тика. - 1999. -№ 10. - С. 34.

9.Ю. П. Поте хина, П. С. Зубарев, А. В. Страхов, М. Э. Бузоверя, Т. А. Яхно, Ю. П. Щербак. Кристал лография и вискозиметрия желчи при желчнокамен ной болезни // Клиническая лабораторная диагности ка. - 2001.-№ 3. - С. 33-35.

10.Савина Л. В. Структурообразование сыворот ки крови в условиях вакуума // Клиническая лабора торная диагностика. - 1999. - №11. - С. 48.

11.Савина Л. В., Конуева О. В., Коротько Г. Г., Яковенко М. С., Новоселя Н. В. Кристаллоскопичес- кая диагностика нарушений экзокринной функции поджелудочной железы у больных с хроническим панкреатитом / IV Международный конгресс «Парен теральное и энтеральное питание». - Москва, 2000. - С. 98.

12.С. Н. Шатохина, В. Н. Шабалин. Профильная дегидратация биологических жидкостей // Клиничес кая лабораторная диагностика. - 1999. - № 9. - С. 38.

13.Daems W. F. - Р. Ж. Биол. химия. - 1965. - № 9. - С. 4-5.

14.Daems W. F. Thesigrafie. - Chem. courant. - 1964, 1963, 1970, 1977.

Таблица № I

Кристаллические и аморфные структуры, встречаемые при «классическом» кристаллоскопической! анализе __биожидкостей организма человека__

1. Одиночные кристаллы Пластинчатые прямоугольники Холестерин и его производные

Октаэдры Са3(Р04)2

Призмы Mg3(P04)2

Пирамиды Са3(Р04)2

2. Кристаллические фигуры (дендриты) Пластинчатые прямоугольники

Линейчатые дендриты с утлом расхождения 90" и 120°

Пластинчатые «кресты»

Фигуры «мох»

Фигуры «папоротник»

Фигуры «комета» Са(С204)2

Фигуры «лук» Са(С204)2

Фигуры «хвощ»

Таблица № 1

Тип образований Структура Химическая природа

пластинчатые (обычно 6 лепестков) Производные холестерина

листовидные (обычно 6 №НС03

лепестков)

3. Дендритоидные структуры Нитевидные

Дихотомически ветвящиеся

Цепочечные

4. Особые структуры Дендритоподобные мелко- и крупноячеистые сетки

Параллельные

Субпараллельные

Сфероидные камеры с дендритами

Реликтовые микротипы

5. Аморфные образования Обычно СаСОз

Примечание: * - различаются по количеству (немного, умеренное количество, большое количество) и по размеру (мелкие, средние, крупные, агрегаты).

Схема. Взаимодействия кристаллических и аморфных структур.

Тип взаимодействий

Налипание Оттеснение

Страничка молодого ученого Таблица № 2

Кристалл Структуры оскопическая характеристика биож Слюна кидкостеи организма человека | Моча имеются только приводимые Слеза структуры) Пот

1. Одиночные кристаллы Прямоугольники - 4, призмы - 2, пирамиды - 1 Прямоугольники - 1, призмы - 0-1, октаэдры - 2 Прямоуголь ники -2-3, пирамиды - 3, Октаэдры - 1 Прямоуголь ники - 0-1, пирамиды -3, октаэдры - 3-4, призмы - 1

2. Дендриты Линейчатые - 1, «кресты» -0-1, «мох», «лук», «комета» - 2-3, прямоутольники-0-1 Линейчатые - 0-1, прямоугольники - 0-1, «мох», «лук», «комета» - 2-3 Линейчатые - 0- 1, прямо угольники -0-1, «хвощ» - 2, «розетки» - 2-3 Линейчатые - 2-3, « лук» - 2, прямоуголь ники -1

3. Аморфные образования Средние, среднее коли-чество Крупные, мало Крупные, среднее коли чество Средние, среднее ко личество

4. Взаимо действие кристаллов и аморфных образований Налипание Оттеснение Налипание Налипание

Таблица № з

Кристаллоско Структуры пическая картина мочи у больных панк Острый панкреатит реатитом | указаны наи Панкреатит ценция) более диагностич (рековалес- ески важные показатели) Хронический панкреатит

1. Одиночные Прямоугольник - 2, призма - Прямоугольник - 1, призма - Прямоугольник - 2, призма -

кристаллы 2, пирамида - 1 3, пирамида - 2 1, пирамида - 2

2. Дендриты Прямоугольник - 2, линейчатые - 2, «мох» - 1, «кресты» - 0 Прямоугольник - 1, линейчатые - 1, «мох» - 0, « кресты» - 1 Прямоугольник - 3, линейчатые - 0, «мох» - 0, «кресты» - 0

3. Аморфные образования Мелкие, мало Средние, среднее количество Мелкие, мало

4. Тип взаимо действия Налипание Налипание Оттеснение

Таблица № 4

Тезиграфическин анализ проб мочи больных панкреатитом

Стадия или форма заболевания Количество центров кристаллизации

NaCl+мочэ NaCl Q

Острый панкреатит 150±33 200±21 0,753±0,067

Панкреатит (реконвалесценция) 60±7 200±21 0,328±0,041

Хронический панкреатит 15+2 200±21 0,075±0,006

Примечание: различия между коэффициентами р достоверны (р<0,05) прямоугольники (дендриты) --*- линейчатые

дендриты - - "кресты "

Динамика изменения к р и с т а л л о с к о п и ч е с к о й картины с течением заболевания

■ прямоугольники

Пирамиды

CRYSTALLOGRAPHIC ANALYSIS: COMMON CHARACTERISTIC

Martusevich A. K.

Kirov State Medical Academy Chair of normal physiology

The crystallization of the biological fluids is a multiplex process of movings of high and low molecular substances and dehydration. In this process three zones of crystallographic picture are formed. There are central, intermediate and marginal zones.

Specimens of urine, blood and saliva were investigated in 150 healthy people and 160 patients with different pathology (diseases of nervous, respiratory systems etc).

The results of biological fluid crystallization were identified with special table and the analyses of these specimens were done by teziocrystalloscopic test.

It has been determined that there are differences between crystallogramms of the human fluids of healthy and sick patients. Crystallographic analysis can be used for primary diagnostics.

КРИСТАЛЛОГРАФИЯ СЛЮНЫ КАК ИНДИКАТОР ЭФФЕКТИВНОСТИ МАЗИ «АЛЬ-ДЕРМ-1»

Катаманова Джемиле Лемаровна 1 , Сатаева Татьяна Павловна 2 , Баличиева Диляра Велишаевна 3 , Ибрагимова Эвелина Энверовна 4 , Османова Наджие Басыровна 5
1 Центр исследования живых систем (г. Симферополь)
2 Медицинская академия им. С.И. Георгиевского Крымского федерального университета им. В.И. Вернадского (г. Симферополь)
3 ГБОУВО РК «Крымский инженерно-педагогический университет» (г. Симферополь)
4 ГБОУВО РК «Крымский инженерно-педагогический университет» (г. Симферополь)
5 ГБОУВО РК «Крымский инженерно-педагогический университет» (г. Симферополь)

CRYSTALLOGRAPHY OF SALIVA IS THE CRITERIA OF OINTMENT «AL-DERM-1» EFFICIENCY

Katamanova Djemile Lemarovna 1 , Sataeva Tatiana Pavlovna 2 , Balichieva Dilara Velishaevna 3 , Ibragimova Evelina Enverovna 4 , Osmanova Nadjie Basyrovna 5
1 Center of Live systems research, Simferopol
2 Crimean Engineering and Pedagogical University, Simferopol
3 Medical Academy of S.I. Georgiyevsky of the Crimean Federal University of V.I. Vernadsky, Simferopol
4 Medical Academy of S.I. Georgiyevsky of the Crimean Federal University of V.I. Vernadsky, Simferopol
5 Medical Academy of S.I. Georgiyevsky of the Crimean Federal University of V.I. Vernadsky, Simferopol

Библиографическая ссылка на статью:
Катаманова Д.Л., Сатаева Т.П., Баличиева Д.В., Ибрагимова Э.Э., Османова Н.Б. Кристаллография слюны как индикатор эффективности мази «Аль-Дерм-1» // Современные научные исследования и инновации. 2016. № 3 [Электронный ресурс]..03.2019).

Развитие кристаллографических методов исследования биологических субстратов приоткрыло возможности для изучения состава и физико-химических свойств биосред организма человека, в том числе слюны. Это проявляется в диагностической роли кристаллографии, тогда как возможности для исследования состояния организма и его адаптивных резервов рассматриваются лишь в единичных работах . Изучение функционального состояния организма человека – актуальное направление современных медико-биологических и гигиенических исследований. В связи с этим разрабатываются различные методы оценки физиологического статуса организма. В данном контексте особую ценность приобретают неинвазивные методы диагностики. В последние десятилетия активно изучаются биологические жидкости организма при помощи кристаллографических методов, основывающихся на качественном и количественном изучении кристаллограмм биосубстратов. Сущность кристаллографического метода – анализ морфологии кристаллов, формирующихся в процессе дегидратации биологических жидкостей организма . Данные подходы нашли широкое применение при диагностике широкого спектра заболеваний. В частности, слюна используется для оценки заболеваний ротовой полости , желудочно-кишечного тракта , сахарного диабета , а также функционального состояния организма при физической нагрузке и после восстановления . Представленные данные свидетельствуют, что криталлография слюны достаточно объективно отражает функциональное состояние организма как при физических нагрузках, так и при заболеваниях различной этиологии. Особую ценность кристаллоскопия приобретает в связи с необходимостью проведения скрининговых исследований для выявления патологических состояний на ранних стадиях их развития. Кроме того метод информативен, не требует больших финансовых вложений и достаточно прост.
Несмотря на большое количество работ по диагностике состояния организма методами кристаллографии, на наш взгляд недостаточно уделено внимания оценке действия на организм различных фармацевтических препаратов, в связи с этим мы использовали данный поход в своих исследованиях, цель которых заключалась в оценке эффективности мази «Аль-Дерм-1» при помощи кристаллографического исследования слюны.
Нами проведены исследования слюны 26 студентов, давших свое согласие на участие в эксперименте, выполненном в соответствии с принципами Хельсинской Декларации (2013). Все обследуемые были проинформированы о цели исследования и дали согласие на участие в нем. В эксперименте приняли участие студенты 1-2 курсов специальности «Охрана труда» Крымского инженерно-педагогического университета в возрасте 17-19 лет (10 девушек и 16 юношей). Сбор биологического материала (слюны) в объеме 3-4 мл проводился с утра, до начала занятий, так как в активном состоянии и при физических нагрузках кристаллизация слюны ухудшается . Перед проведением эксперимента испытуемые промывали ротовую полость водой. Образцы слюны собирали дважды: до нанесения мази и после. Препараты для микроскопического анализа готовились путем нанесения 0,3 мл слюны на предметное стекло с последующей окраской метиленовой синью и высушиванием в горизонтальном положении в течение 24 часов. Изучение фаций кристаллограмм осуществляли с помощью микроскопа Olympus СХ-1 (Japan) при увеличении в 400 раз. Полученные кристаллограммы оценивали по 5-балльной шкале . В работе была использована мазь «Аль-Дерм-1» (патент № 83502 от 10.09.2013 г., зарегистрирован в государственном реестре патентов Украины), оказывающая противовоспалительное, противозудное, противоаллергическое, кератолитическое и противомикробное действие. Кристаллографию фаций слюны проводили до и через полчаса после нанесения мази с наружной поверхности предплечья в точке ТR-5 Вай-гуань (наружные ворота), применяемой в акупунктуре – точке, координирующей и регулирующей метеочувствительность . Следует отметить, что точка – ограниченный участок кожи и подкожной клетчатки, в котором имеются комплексы взаимосвязанных структур, сосудов микроциркулярного русла, нервов, клеток соединительной ткани. При нанесении мази на точку создается депо биологически активных веществ, оказывающих соответствующее влияние на нервные терминалы, и происходит образование связей между точкой и внутренним органом, в нашем случае – со слюнными железами.
Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики, математические расчеты выполнялись посредством Microsoft Excel 2003. Оценку достоверности наблюдаемых изменений определяли по t-критерию Стьюдента (показатели считались достоверными при значениях р<0,05).
Анализ 52 образцов слюны испытуемых позволил установить, что кристаллограммы, полученные до и после нанесения мази «Аль-Дерм-1» существенно отличаются между собой. В частности, у большинства волонтеров были обнаружены кристаллограммы, не имеющие четкого рисунка, представляющие мелкие, хаотично разбросанные в поле зрения структуры (рис. 1).

Рис. 1. Кристаллограммы ротовой жидкости волонтеров № 8 (а), № 9 (б), № 12 (в), № 13 (г) и № 15 (д), полученные до применения мази «Аль-Дерм-1».

Следует отметить, что при микрокристаллизации слюны в «норме» характерен четкий рисунок крупных удлиненных кристаллопризматических структур, идущих от центра капли, сросшихся между собой и имеющих древовидный или папоротникообразный вид, что соответствует 5 баллам . В проведенном исследовании ни одна из полученных кристаллограмм не соответствовала максимальному количеству баллов. Данное явление может быть следствием патологических изменений, при которых структура кристаллов нарушается и вместо них под микроскопом обнаруживаются бесформенные образования. Анализ полученных кристаллограмм показал, что фоновые показатели (до нанесения мази) характеризуются мелкой зернистостью, занимающей меньше 50% площади, кроме нее были обнаружены аморфные образования (тела некристаллической природы) и мелкие кристаллические структуры самого разного вида. Данный факт вызывает необходимость проведения диагностического исследования функционального состояния студентов, принимавших участие в эксперименте, с целью выявления причин нарушения кристаллизации их слюны. Ранжирование кристаллограмм, полученных до нанесения мази, позволило идентифицировать исследуемые пробы следующим образом: 1 группа: 5 проб оценены на 4 балла (19,24%), 2 группа: 10 проб – 3 балла (38,46%), 3 группа: 9 проб – 2 балла (34,61%) и 4 группа: 2 пробы – 1 балл (7,69%). Таким образом, средний балл кристаллограмм до нанесения мази составил 2-3 балла.
После применения мази мы наблюдали усиление микрокристаллизации слюны, свидетельствующее об улучшении физиологического состояния организма 80% испытуемых (рис. 2).

Рис. 2. Кристаллограммы ротовой жидкости волонтеров № 8 (а), № 9 (б), № 12 (в), № 13 (г) и № 15 (д) через 30 минут после применения мази «Аль-Дерм-1».

Кристаллограммы характеризовались выраженным перераспределением кристаллического компонента фации от мелких разрозненных одиночных кристаллических структур в сторону сложных поликристаллических образований типа хвоща, листа, дробной зернистости и островков, превалирующих в центральной зоне микропрепарата и занимающих более 50% площади поля зрения.
Анализ кристаллограмм, полученных после нанесения мази «Аль-Дерм-1» позволил установить более высокую оценку, составившую в среднем 3-4 балла. Были получены следующие результаты: 1 группа: 2 пробы – 5 баллов и 3 пробы – 4 балла; 2 группа: 2 пробы – 5 баллов, 4 пробы – 4 балла и 4 пробы – 3 балла; 3 группа: 1 проба – 4 балла, 5 проб – 3 балла и 3 пробы – 2 балла; 4 группа: 2 пробы по 2 балла. Таким образом, анализ полученных результатов на биопробах показал наличие изменения структуры кристаллов слюны после применения мази «Аль-Дерм-1» в сторону усиления кристаллизации, образования листовидных, мохообразных, папоротникообразных форм, что, по-видимому, свидетельствует о положительном влиянии мази на функциональное состояние организма испытуемых, отражающееся на качественном изменении структуры кристаллов слюны.
Кристаллографическое исследование слюны позволило получить диагностическую информацию и оценить эффективность тестируемой мази, оказывающей положительное влияние на функциональный статус организма испытуемых, что отражалось на изменении морфологии кристаллов слюны, регистрируемой при помощи кристаллоскопии.
Анализ результатов кристаллообразования биосубстрата показал, что после нанесения мази имеет место адаптивная перестройка морфологии дегидратированной биосреды, сопровождающаяся увеличением плотности кристаллов и аморфных тел. Следовательно, мазь «Аль-Дерм-1» обладает выраженным адаптивным действием, проявляющемся уже в течение 30 минут после ее нанесения. Результаты проведенного исследования позволили прийти к заключению, что кристаллографический метод исследования эффективен не только в диагностике функционального состояния организма при заболеваниях различной этиологии и физических нагрузках, но также может быть использован для скрининга терапевтического эффекта различных препаратов.

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА
«Использование кристаллоскопии для выявления острого лейкоза у мышей линии AKR»

Введе-ние................................................................................ 3
Глава I. Обзор литерату-ры......................................................... 3
1.1 Кристаллография биологических жидкостей........................... 6
1.1.1 Основные понятия кристаллического состояния вещества.......... 6
1.1.2 Процессы кристаллизации в живых систе-мах........................... 8
1.1.3 Кристаллографические особенности биологических жидко-стей... 8
1.1.4 Морфология биологических жидкостей............................... 8
1.2 Кристаллографические методы исследования......................... 12
1.2.1 Предпосылки исследования феномена кристаллизации биологических жидкостей...................................................... 12
1.2.2 Современное состояние представлений о кристаллографических методах исследова-ния............................................................... 18
1.2.2.1 Общая характеристика методики тезиокристаллоскопии биологических субстратов........................................................... 25
2. Объекты, цели и методы исследования..................................... 26
2.1 Цели, задачи и этапы исследования...................................... 26
2.2 Подготовка посуды и рабочего места.................................... 28
2.3 Применяемые методы исследования..................................... 28
2.3.1 Методика тезиокристаллоскопического теста........................ 28
2.4 Статистическая обработка данных.......................................... 43
3. Результаты исследования...................................................... 44
3.1 Морфология мочи здоровых и искусственно зараженных лейкозом мышей................................................................................ 44
3.2 Основные критерии оценки тезиграфических фаций мочи у мы-шей в норме и при патологии (лейкоз)......................................... 46
3.3 Мыши линии AKR............................................................ 49
3.4.Динамика развития лейкоза................................................ 50
3.5 Выводы...........................................................................
Список использованной литерату-ры............................................. 52

Введение

Современные биотехнологии являются синтезом научных достижений в различных областях естествознания: медицине, биологии, математике, физике, химии и других наук. Ж.Алферов - лауреат Нобелевской премии в области физики отметил, что в последние годы особо значимые результаты были получены его учениками в работах, выполненных на стыке физики и биологии, физики и медицины. Таким примером может служить подход к решению острейшей современной социальной проблемы – диагностике и эффективному лечению злокачественных заболеваний. Ежегодно от лейкозов гибнут многие миллионы людей детского и старшего возрастов, а также сельскохозяйственных животных высокоценных пород. Во всём мире технологии развития и лечения лейкоза у людей изучаются на животных строго определенной генетической линии. В ФГУ «КНИИГ и ПК ФМБА России» более 10 лет проводятся исследования развития перевивного лейкоза на модели мышей линии АКR. Несмотря на достигнутые успехи в области экспериментальной и клинической лейкозологии, проблема описанной патологии весьма далека от окончательного разрешения.
В последние 40 лет активно разрабатываться новое диагностическое направление – кристаллоскопия, основанная на определении качественного состава биологических жидкостей по образованию в них кристаллических структур.
Первый опыт клинического применения кристаллографии относится к началу 60-х годов прошлого столетия. Первоначально большинство исследователей использовали тезиграфический метод. В 1964 году Daems провел исследование кристаллограмм крови больных пациентов с гипертрофией и карциномой простаты. J.Leal и B.Finlayson (1977) установили особенности кристаллообразования мочи.

А.А.Кожиновой и Л.С. Масленниковой (1968). В.Я. Неретиным и В.И. Кирьяковым (1977) данный метод был использован для исследования спинномозговой жидкости больных с различными заболеваниями головного и спинного мозга. В работе Д.Б.Каликштейна с соавторами (1981) исследована тезиграфическая картина мочи больных с различными заболеваниями почек. В.В.Усин (1995) изучил кристаллографические изменения ликвора и слюны у больных с хроническими нейрогенными болевыми синдромами головы и лица. Кроме того, тезиграфия применялась с диагностическими и прогностическими целями в педиатрии, гинекологии, гастроэнтерологии и в других областях медицины.
В настоящее время кристаллоскопический анализ используется для ис-следования практически всех биологических жидкостей (кровь, моча, слюна, спинномозговая жидкость, желчь, назальный секрет и др.). Кристаллические структуры биологических жидкостей содержат важнейшую информацию о состоянии определенного органа, отдельной системы организма и организма в целом.
В настоящее время интерес ученых к использованию метода кристаллографии биологических жидкостей в медицине остается высоким. Так, разработаны и внедрены в практику многочисленные диагностические методики, способствующие изучению широкого спектра характеристик биосубстратов (биохимические, иммунологические, морфологические, биофизические тесты и др.). Слабым местом большинства перечисленных методик является высокая затратность из-за привлечения дорогостоящих реактивов, оборудования и подготовки высококвалифицированных кадров. Все вышеперечисленное обусловливает необходимость содержания и поддержания достаточно большого количества вспомогательных служб.
Однако изменившиеся экономические условия требуют разработки и внедрения в практику высокоэффективных и экономичных методов диагностики лейкозов.
Кристаллоскопический метод обладает значительной диагностической чувствительностью и поэтому нашел широкое применение сначала в практике судебно-химического анализа, а затем и в медицине. Он позволил расширить дифференциально-диагностические возможности в определении характера патологического процесса (аллергического, воспалительного и др.), в выявлении наличия анемии, отека, интоксикации и степени ее выраженности. С помощью метода кристаллографии биополимеров возможно определение патологии различных органов. Поскольку данная методика подразумевает соединение материальных частиц с кристаллообразующим раствором, по образованному рисунку кристаллов можно судить и о характере злокачественного процесса (Конторщикова К.Н. и соавт. (2002-2012).
Целью настоящей дипломной работы явилось разработка метода кри-сталлоскопического анализа мочи мышей линии АKR для диагностики ост-рого лейкоза.

1 Обзор литературы.
1.1 Кристаллография биологических жидкостей

Термин «кристалл» происходит от греческого слова «krystallos», что означает «лёд». В кристалле атомы и молекулы образуют упорядоченную структуру (кристаллическую решётку). Кристаллы имеют важное значение как в неживой, так и в живой природе, что явилось основанием для выделения самостоятельной отрасли – кристаллографии. Кристаллография – это наука о структуре и физических свойствах одиночных кристаллов и кристаллических агрегатов, явлениях, протекающих в кристаллической среде под влиянием внутренних свойств или внешних воздействий.

1.1.1 Основные понятия кристаллического состояния вещества

Кристаллы образуются из пара, раствора, расплава, аморфного вещества или из вещества, находящегося в другом физическом состоянии. Кристаллизация начинается при определенных внешних условиях, например, переохлаждении жидкости, перенасыщении пара, дегидратации раствора, когда постепенно возникает множество мелких кристаллов вокруг центров кристаллизации. Кристалл растёт, присоединяя атомы или молекулы из жидкости или пара.
Различают равновесные и реальные формы кристаллов. Равновесная форма кристаллов достигается только в равновесных условиях, т.е. при бесконечно медленном процессе кристаллизации.
Поскольку параметры внешней среды неоднородны во времени и в пространстве, в структуре кристалла неизбежно возникают различные дефекты. Так, реальные (вынужденные) формы кристаллов отражают не только симметрию кристалла, но и влияние внешних условий роста (концентрация различных веществ в среде формирования кристалла, температура, давление и прочее) на любые изменения которых кристаллы очень чутко реагируют. Некоторые формы кристаллов представлены на рис.1.

а б в

г д е

ж з и

Рис.1 Формы кристаллов в различных биологических жидкостях: а,б-нитевидные, в,г,д,е,ж – сферолитные образования с радиально расположенными иглами; з-угнетенный дендрит; и – разветвленный дендрит.
Большинство природных и технических твердых материалов являются поликристаллами, одиночные кристаллы называют монокристаллами. При кристаллизации металлов и солей часто образуются древовидные кристаллы – дендриты. При кристаллизации из одного или нескольких центров образуются сферолиты, состоящие из радиально расположенных кристаллических игл.

1.1.2 Процессы кристаллизации в живых системах

Все биологические среды организма животных и человека имеют спе-цифичную молекулярную упорядоченную структуру, поскольку представляют собой лиотропные жидкие кристаллы. Живой организм представляет собой сложную высокодинамичную систему, в которой постоянно происходят процессы взаимодействия множества структурных компонентов между собой и окружающей средой. В условиях нормы колебания биофизических показателей организма ограничены сравнительно узкими пределами. Однако в определенных ситуациях они могут выходить за рамки нормальных границ на достаточно длительный период. В одних случаях это объясняется адаптацией организма к необычным новым условиям существования, в других - глубоким нарушением гомеостаза со стойкой декомпенсацией. Эти сложные высо-кодинамичные процессы находят своё четкое отражение в особенностях кристаллических структур различных биологических жидкостей или биополимерах.

1.1.3 Кристаллографические особенности биологических жидкостей

Известно, что нарушение метаболизма, как компонента патогенеза различных заболеваний, приводит к изменению химического состава и физикохимических свойств биологических жидкостей (далее биожидкостей). Сложные динамические процессы, протекающие в биожидкостях, отражаются в морфологических особенностях структур, образующихся во время кристаллизации образцов биожидкости. В настоящее время разработаны и используются в клинической практике оригинальные методы диагностики на основе структурного анализа биологических жидкостей. Структуры твёрдой фазы биологических жидкостей формируются молекулами и, в основном, микроагрегатами органических и минеральных веществ, растворённых в биожидкости. Специфические особенности структур определяются общими физико-химическими свойствами биожидкости, количественным и качественным составом молекул данных веществ, их способностью устанавливать внутримолекулярные и межмолекулярные химические связи. В результате структура биологических жидкостей несёт интегральную информацию о состоянии метаболизма омываемых биожидкостью органов субъекта и о гомеостазе организма в целом.
Морфология биологических жидкостей является апробированным научным направлением в области медицины, ветеринарии и других наук. Структурообразование биожидкости при кристаллизации имеет чёткие закономерности.
Загрязнение окружающей среды различными токсинами, среди кото-рых особое место занимают тяжелые металлы (ТМ), приводит к существен-ному увеличению вероятности возникновения определенных заболеваний, в том числе и онкологических. Сочетание морфологического анализа биожидкости организма с ее локальным элементным анализом может послужить новым аналитическим инструментом для исследований в области ранней диагностики онкологических заболеваний.
Успехи в совершенствовании микрохимического анализа, кристаллооптики и тезиграфии явились основанием для изучения кристаллических структур биологических жидкостей человека и животных при различной патологии. Кристаллографические процессы в биологических жидкостях привлекают все большее внимание учёных. Исследования, проведенные в течение последних десятилетий, были ориентированы на выявление взаимосвязи кристаллографических особенностей биожидкостей с развитием патологических процессов в организме; либо ставили своей задачей изучение влияния внешних воздействий на формирование кристаллических структур в биожидкостях (Скопинов С.А. и др.1997).
Таким образом, в биологической жидкости можно наблюдать ком-плекс структурных перестроек от раствора до кристаллов. Кристаллографический анализ дает возможность обнаруживать патологические изменения кристаллической решётки на надмолекулярном уровне. Эти изменения могут служить ранним диагностическим критерием развития патологического процесса.

1.1.4. Морфология биологических жидкостей

Изучение морфологической картины различных биожидкостей – из-вестное в естествознании направление, к которому в последние годы стало проявляться особое внимание учеными многих дисциплин. В настоящее время разработан способ получения информации о состоянии организма, функции отдельных органов и тканей на стадии выраженных клинических проявлений заболевания и на досимптомном этапе, то есть на уровне развития патологического процесса той или иной природы (воспалительный, онкологический, камнеобразования, гипоксически-ишемический, склеротический и др.). Способ кристаллографии различных биополимеров прост по технике постановки и учету результатов. Исследуется морфологическая картина дегидратированной (высушенной) капли биологической жидкости, которая представляет собой стандартный тонкий срез. Например, при исследовании капли мочи можно определить активность процесса камнеобразования в почечной ткани и состав имеющегося или формирующегося почечного камня (уратный, оксалатно-кальциевый, фосфатно-кальциевый); острое или хроническое течение кандидоза органов мочеполовой системы, гипоксически-ишемическое повреждение почечной ткани и степень тяжести процесса (гипоксическая нефропатия, интерстициальный нефрит, острая почечная недостаточность, инфаркты почек); бактериальное инфицирование (без определения вида возбудителя).
Одна капля биологической жидкости может рассказать, чем болен человек и каков его биологический возраст. Капелька высохшей жидкости помещается на настоящее стеклышко микроскопа, и на мониторе появляется во не мало раз увеличенное изображение. "В капле слюны, взятой натощак, видны дробные трехлучевые трещины, это свидетельство застоя. А в капле, взятой после завтрака, трещин нет, значит, протоки слюнных желез в порядке. А вот кислотность желудочного сока немного снижена", теперь на экране - капелька сыворотки крови, она выглядит как пуговица с ободком и покрыта радиальными трещинами, структура трещин подвергается тщательному анализу: рисунок на периферии говорит о том, что у пациентки временами повышается давление из-за спазма сосудов.
Профессор С.Н. Шатохина объясняет, что организм можно условно разделить на две системы: клеточную и неклеточную. Весь мир изучает в первом клетки, тем не менее биологические жидкости, которые связывают клетки между собой, несут массу информации об их жизнедеятельности. Когда капля биожидкости высыхает, закодированная в ней информация становится видимой. "При переходе в стойкое состояние прочность связей повышается на два порядка, - объясняют исследователи. - После удаления воды остается пленка, на которой зафиксирован рисунок пространственного расположения элементов, ранее находившихся в растворенном состоянии", болезнь всегда сопровождается накоплением каких-то химических веществ, что изменяет структуру, симметрия нарушается, и появляются те самые "язычки", "листики" или "пластинки", которые профессор С.Н. Шатохина обнаружила у пациентки. А чтобы найти эти закономерности, исследователи разработали особенный метод высушивания капель. О многом может рассказать и капля слюны. В ней отражается кариес и пародонтит. А еще, к примеру, гнойный отит, который ведет к появлению в капле слюны пластинчатых форм. Анали-зируя каплю желудочного сока, специалисты выявляют хронический гастрит и язву; суставной жидкости - артроз; наконец, слезы - глаукому, катаракту, воспалительные процессы в сетчатке.
Сегодня ученые вплотную работают с клиницистами, помогая им увидеть тайные патологии и уточнить методы лечения. Анализируя биожидкости, исследователи могут также определить подлинный биологический возраст человека. Его выдают пластинчатые структуры в сыворотке крови, по химической природе являющиеся холестерином. Из него же в будущем образуются атеросклеротические бляшки на сосудах. Это один из самых величавых "маркеров старения". А еще ученые оценивают обоюдный потенциал здоровья, для этого кровь в пробирке облучают электромагнитным полем или лазером - после такого воздействия межмолекулярные связи разрушаются, поэтому при высыхании такой крови рисунок пленки будет иным, у здорового человека на восстановление связей после облучения уходит четыре часа. Если же на это требуется сутки - трое - стоит забеспокоиться. Исследователи считают, что с помощью этого метода можно определить, способен ли человек ра-ботать в экстремальных условиях

1.2 Кристаллографические методы исследования.
1.2.1 Предпосылки исследования феномена кристаллизации биологических жидкостей

В последнюю четверть прошлого века был отмечен значительный интерес научной общественности к кристаллографическим методам исследования, изучаемым в аспекте их практического применения в качестве альтернативного подхода в клинической диагностике. Они позволяют интегрально оценить способность к кристаллизации различных биологических субстратов. В последние годы стало активно разрабатываться новое диагностическое направление – клиническая кристаллография, основанная на определении качественного состава жидкости по образованию кристаллических структур.
Метод качественного определения химических веществ по их кристал-лографическим признакам впервые предложил ученик М.В. Ломоносова – Т.Е.Ловиц. В 1804 году последний описал два метода качественного анализа веществ – метод «выветренных налетов солей» и метод, основанный на изменении нормального образования кристаллов путем введения в раствор кристаллизирующегося вещества другого ингредиента, заложив этим основу двух современных направлений кристаллографии:
1) кристаллография нативных жидкостей – метод, основанный на определении качественного состава жидкости по образуемым ей при выпаривании кристаллам;
2) тезиграфия – метод, основанный на добавлении к исследуемой жидко-сти стандартного кристаллообразующего раствора и анализе изменений в кристаллах стандартного раствора в присутствии испытуемой жидкости.
Первый опыт клинического применения кристаллографии относится к началу 60-х годов прошлого столетия. Первоначально большинство исследователей использовали тезиграфический метод. В 1964 году Daems провел исследование кристаллограмм крови пациентов с гипертрофией и карциномой простаты. Leal J.и Finlayson B. (1977) установили особенности кристаллообразования мочи.
Об использовании в отечественной медицине методов кристаллографического исследования (КГИ) впервые сообщено в работе
Кожиновой А.А. и Масленниковой Л.С. (1968). Неретиным В.Я. и Кирьяковым В.И. (1977) данный метод был использован для исследования спинномозговой жидкости больных с различными заболеваниями головного и спинного мозга. В работе Д.Б.Каликштейна с соавторами (1981) исследована тезиграфическая картина мочи больных с различными заболеваниями почек. Усин В.В. (1995) изучил кристаллографические изменения ликвора и слюны у больных с хроническими нейрогенными болевыми синдромами головы и лица. Кроме того, тезиграфия применялась с диагностическими и прогностическими целями в педиатрии, гинекологии, гастроэнтерологии и в других областях медицины.
В настоящее время кристаллографический анализ используется для исследования практически всех биологических жидкостей (кровь, моча, слюна, спинномозговая жидкость, желчь, назальный секрет и др.). Кристаллические структуры биологических жидкостей содержат важнейшую информацию о состоянии соответствующих органов и тканей.
Кристаллографический анализ слезной жидкости (СЖ) для диагностики офтальмологической патологии впервые был использован
Ченцовой О.Б. с соавторами в 1985 году. Ими была предложена методика тезиграфии слезной жидкости – кристаллография с добавлением спиртового раствора хлорной меди. В коническую пробирку помещается 0,02 мл слезы и при постоянном встряхивании добавляется 0,1 мл 2% спиртового раствора хлорида меди. Пробирку закрывают ватным тампоном и оставляют для отстаивания при комнатной температуре. Через 1 час 20 минут капля полученного раствора наносится на предметное стекло, которое в чашке Петри помещается в термостат при температуре 25°С на два часа. По истечении срока инкубации проводится макро- и микроскопическая оценка результатов.
Были отмечены особенности тезиграфической картины у больных с воспалительными, дистрофическими и опухолевыми заболеваниями глаз и глазницы. По данным Ченцовой О.Б. с соавторами кристаллографическая картина (КГК) слезной жидкости в норме у взрослых и детей представляет собой прозрачные, длинные, редко расположенные кристаллы цилиндрической формы, которые собраны в правильный геометрический рисунок, чаще всего в виде треугольника. Ченцовой О.Б. с соавторами (1989) проводилось КГИ СЖ для дифференциальной диагностики заболеваний орбиты. Авторами выявлены качественные отличия от нормы в препаратах слезы у пациентов с эндокринной офтальмопатией, заболеваниями орбиты воспалительного характера и новообразованиями.
С этого времени кристаллографическое исследование использовалось этими и другими авторами в диагностике различных заболеваний глаз.
Тюриков Ю.А., Покоева В.А. (1992) использовали методику тези-графии с добавлением насыщенного водного раствора глицина и суточной экспозицией при комнатной температуре. Выявлены характерные изменения в кристаллограммах больных с внутриглазными и орбитальными новообразованиями.
Ряд авторов использовали тезиграфию СЖ не только для диагностики, но и для динамического наблюдения КГК СЖ пораженного глаза (Кокарев В.Ю. с соавт., 1990; Сомов Е.Е., Бржеский В.В.,1994; Е.И.Устинова с соавт. (1996) рекомендовали метод кристаллографического исследования СЖ в качестве дополнительного лабораторного теста для дифференциальной диагностики и уточнения фазы активности туберку-лезного процесса.
Чухман Т.П. (1999) усовершенствовала методику тезиграфии СЖ, предложив заменить длительное отстаивание смеси слезы и кристаллообразующего раствора центрифугированием, что сократило время исследования. Также проведено КГИ СЖ при различных воспалительных заболеваниях глаз и выделены характерные типы кристаллов, что позволило своевременно выявлять осложнения еще в доклинической стадии. Кроме того, автором изучено влияние на кристаллогенез различных внешних факторов (температура высушивания препаратов, влажность), а также методов забора слезы.
Интерес ученых к использованию метода тезиграфии биологических жидкостей в медицине и в настоящее время остается высоким. Однако тези-графия оказалась достаточно трудоемкой методикой, требующей примене-ния дополнительных реактивов и сложной при интерпретации результатов (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н., 1997). Кроме того, не известны закономерности процесса кристаллизации, на которых строится метод тезиграфии. Поиск более простых и доступных способов кристаллографического исследования привел к появлению ряда работ, посвященных кристаллографии нативных препаратов биожидкостей.
Вследствие этого назрела необходимость разработки экспресс-методики, которую возможно было бы применить в качестве первичного теста при диагностике различных заболеваний. Причем необходимыми требованиями при его выборе являются достаточная степень точности и возможность широкого применения без вложения значительных материальных средств (Меньшиков В. В., 1988; Назаренко Г. И., Кишкун А. А., 2000; Зеленин В. А., Булычев В. Ф., Стеклова Г. П. с соавт., 2004).
Данной проблемой заинтересовались специалисты различных областей медицины. Следствием этого стало бурное развитие саливадиагностики, которая, с одной стороны, была неинвазивной, с другой, позволяла получить быстро предварительные результаты (Боровский Е. В., Леонтьев В. К., 1991; Сукманский О. И., 1991; Комарова Л. Г., Алексеева О. П., 1994; Антропова И. П., Габинский Я. Л., 1997; Бутаев М. Т., 1998; Григорьев И. В., Чиркин А. А., 1998; Булгакова В. А., 1999; Еричев И. В., Коротько Г. Г., Решетова И. В., 1999; Денисов А. Б., 2000, 2001;).
Методы качественного определения химических соединений по их спо-собности к кристаллизации были впервые предложены Т. Е. Ловицем, учеником М. В. Ломоносова, еще в 1804-1805 гг. Он в своих работах описал два оригинальных теста для качественного анализа структуры исследуемых веществ. Это «метод выветренных налетов солей» (кристаллических налетов), а также микрокристаллические реакции. Первый из вышеперечисленных и был положен в основу разработанного значительно позже способа качественного определения лекарственных препаратов (Книжко П. О., 1956; Бубон Н. Т., Пузыревский К. Я., 1965; Никольская М. Н., Гандель В. Г., Попков В. А., 1965; Лобанов В. И., 1966). Методика микрокристаллических реакций сейчас нашла применение в судебной медицине (Белова А. В., 1960; Семенова Т. Д., 1972; Тахер М. А. Ассад, 1995).
В условиях развития представлений о кристаллизации биологических жидкостей человека актуальность приобретает вопрос о применимости ее при диагностике различных патологических состояний (Кокуева О. В., Савина Л. В., Ли А. М., 2000; Зубеева Г. Н., Мотылева И. М., Потехина Ю. П., 2001; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001; Воробьев А. В., Воробьева В. А., Нештакова Н. Л., 2002; Алексеева О. П., Воробьев А. В., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. с соавт., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Анаев Э. Х., Шатохина С. Н., Чучалин А. Г., 2004).
В связи с этим в достаточно обособленную отрасль медицинской науки сейчас выделяются кристаллоскопические методы исследования, имеющие своей целью расшифровку метаболической информации, сокрытой в качественном и количественном составе биологических сред.
Кроме того, унификации и упрощению проведения кристаллографиче-ских исследований может способствовать единая схема анализа. Это будет полезно как в дифференциальной диагностике, так и при выполнении ориентировочного теста.
Важным фактором стандартизации результатов диагностической кри-сталлизации биологических субстратов организма может стать и единая форма заключения по кристаллоскопическому тесту, включающая сведения о качественных и количественных сдвигах состава фации пациента по отношению к фации практически здоровых лиц (изменения количества и размеров структур, появление патологических для данной биожидкости образований и т. п.).

1.2.2 Современное состояние представлений о кристаллографических
методах исследования

Кристаллографические методы исследования – совокупность методологических подходов к извлечению информации о метаболизме и гомеостазе организма и/или его частей, основанных на феномене свободного или инициированного базисными веществами различного химического состава кристаллообразования высушенного жидкого или приводимого в жидкое состояние биологического материала с последующей интерпретацией результатов кристаллогенеза.
За последние тридцать лет были сформированы многочисленные мето-дические подходы к проведению диагностической кристаллоскопии, однако необходимо отметить, что большинство из них имеют своей сущностью лишь модификацию условий проведения дегидратационного процесса, тогда как представляется возможным выделить только принципиально только три варианта: свободная кристаллизация, в случае, если высушиванию подвергается непосредственно анализируемая биологическая жидкость; инициированный кристаллогенез, когда визуализируется результат дегидратации системы «биосреда – базисное кристаллообразующее вещество» преимущественно на основании исследования структурогенеза последнего; парциальная кристаллизация (метод модельных композитов) – совокупность способов воссоздания отдельных составляющих кристаллоскопической картины определенного биологического субстрата, в связи с чем является значимым прежде всего для научных изысканий.
В целом к настоящему времени в современной кристаллоскопии пред-ложены следующие методы:
1) Классическая кристаллоскопия (Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. с соавт., 1990; Савина Л. В., 1992, 1999; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001; Алексеева О. П., Воробьев А. В., 2003) – один из наиболее распространенных вариантов выполнения дегидратационного теста, сущностью которого, как уже указывалось, является непосредственная кристаллизация биологических жидкостей. Подготовка препаратов может проводиться как при комнатных условиях, так и в термостате (37-400С), однако, по данным многочисленной литературы, длительность приготовления микропрепаратов биологических сред составляет 1-2 суток, что явно не соответствует требованиям, предъявляемым к экспресс-тестам. В связи с этим, требуется существенная корректировка условий высушивания с целью оптимизации времени, затрачиваемого на приготовление микропрепарата.
Необходимо отметить, что данный кристаллоскопический подход позволяет оценить кристаллообразующие свойства биожидкости, а, следовательно, не только получить диагностически значимые фации (образцы-кристаллизаты), но и установить присутствие отдельных компонентов анализируемого субстрата (Савина Л. В., Павлищук С. А., Самсыгин В. Ю. с соавт., 2003). Данный вопрос не имеет адекватного разрешения в специализированной литературе, но важен как практических выявления патологических включений в биологические среде, биологии и медицине – исследование патогенетических моментов патологии человека и животных, а также обоснованный подбор и оценка эффективности медикаментозной и немедикаментозной терапии (Буйко А. С., Цыкало А. Л., Терентьева Л. С. с соавт., 1977; Еричев И. В., Коротько Г. Г., Решетова И. В., 1999; Зайчик А. Ш., Чурилов Л. П., 2001; Алексеева О. П., Воробьев А. В., 2003; Байдаулет И. О., 2003). Это обусловливает необходимость изучения особенностей кристаллогенеза составляющих биологических жидкостей, в том числе и путем парциального моделирования дегидратации. Определенные пути решения поставленного вопроса предложены Л. В. Савиной с соавт. (2003), в соответствии с работами которой воссоздание единой картины биокристаллизации представляется возможным произвести поэтапном исследованием кристаллообразования растворов, представляющих собой моносистемы, содержащие 1 компонент биосреды в концентрации, четко ей соответствующей («модельный компо-зит»). При всей значимости данного методического подхода необходимо признать, что в этом случае не учитывается один из наиболее существенных факторов, определяющих характер кристаллогенеза биосубстрата – наличие межмолекулярных взаимодействий между различающимися по химическому строению составляющими биожидкости, которое, в свою очередь, играет значительную роль в формировании дефинитивной кристаллоскопической картины, в частности определяя количество и диаметр «первичных зон» фации, трансформируемых с течением дегидратационного процесса в пояса кристаллизации (Колединцев М. Н., 1999; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В., 2002; Колединцев М. Н., Майчук Н. В., 2002).
Подобные попытки моделирования кристаллообразования были пред-приняты Г. Г. Коротько (2000), что будет обсуждено далее.
2) Тезиграфия (Нефедова Н. Б., Цывенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Каликштейн Д. Б., 1986; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) также относится к превалирующим и наиболее общим способам выполнения кристаллоскопического теста и представляет собой дополнительное введение в высушиваемую биожидкость организма человека различных химических веществ с целью инициации процессов кристаллообразования. Для этого используют широкий спектр кристаллообразователей (NaCl, CaCl2, MgCl2 и другие), в большинстве своем обладающих комплексообразующими свойствами, причем концентрации у различных авторов в значительной степени варьируют.
В лабораториях, использующих данный кристаллографический метод, его реализация осуществляется путем применения классической тезиграфии, т.е. рассмотрения исключительно результата дегидратации системы, состоящей из биоматериала и базисного кристаллообразующего вещества как самостоятельного образца, что существенно затрудняет интерпретацию полученных сведений вследствие объективных затруднений в сопоставлении образцов, полученных в различных условиях и неодинаковом функциональном статусе организма обследуемых лиц. В связи с этим, тезиграмма, сформированная в соответствии с описанным выше подходом, требует сличения полученного результата с заранее имеющимися "паттернами" ("фотографический" подход) (Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2002; Байдаулет И. О., 2003; Белоглазов В. Г., Атьков Е. Л., Федоров А. А. с соавт., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. с соавт., 2003; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) либо значениями эмпирически обнаруженных параметров (Тарусинов Г. А., 1994; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В., 2002), однако данный фактор определенно и значимо снижает информативность и достоверность тезиграфической диагностики.
Важным представляется подчеркнуть, что в настоящее время отсутствует общепринятая схема-алгоритм описания, анализа и интерпретации тезиграфической фации, как нет и единой методики ее получения.
Имеются единичные сообщения, посвященные использованию кон-трольного образца базисного веществ (Тарусинов Г. А., 1994), однако его применение по непонятным причинам резко ограничено (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003; Мартусевич А. К., 2004).
3) Профильная дегидратация (Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 1999). Подразумевает нанесение биологических жидкостей на предметное стекло, предварительно обработанное раствором лецитина определенной концентрации. С помощью лецитина представляется возможным, по мнению авторов, изменить сродство кристаллов к основе, а, следовательно, трансформировать термодинамические характеристики дегидратируемого биосубстрата.
4) Вакуумная кристаллоскопия (Савина Л. В., 1999) предусматривает приготовление (высушивание) препаратов в условиях вакуума. Этим достигается изолированность дегидратируемого образца от внешней среды, создается относительно закрытая система, в которой и осуществляется непосредственно удаление жидкой части биосреды и процессы биокристаллизации.
5) Кристаллизация биологических жидкостей в закрытой ячейке (Ан-тропова И. П., Габинский Я. Л., 1997). Обеспечивается изоляция формирующегося образца от внешней среды аналогично вакуумной кристаллоскопии, однако технически данный способ более удобен для практического применения, так как не требует создания условий вакуума, а лишь использования закрытой ячейки, в которой возможным представляется проводить непосредственный микроскопический анализ. Авторами модификации применялось предварительное центрифугирование биоматериала.
6) Поясная кристаллоскопия – кристаллографический метод исследования, основанный на изучении поясов кристаллов и отдельных кристаллических образований (Колединцев М. Н., 1999; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В., 2002; Колединцев М. Н., Майчук Н. В., 2002). Физико-химическим базисом способа является неоднородность компонентного состава биологических жидкостей в зависимости от молекулярных масс веществ, являющихся элементами данной биосреды, а, следовательно, различной их способности к передвижению по фации в процессе ступенчатой дегидратации образца и формирования фации. Это приводит к образованию одного или (значительно чаще) нескольких поясов кристаллизации, регистрация которых и позволяет судить о данной характеристике биологической жидкости (Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В., 2002).
7) Метод клиновидной дегидратации (В. Н. Шабалин, С. Н. Шатохина, 2001-2005). Способ дегидратации капли биологической жидкости, размещенной на прозрачной плоскости. Капля имеет форму клина на поперечном разрезе, что создает условия неравномерной скорости дегидратации в радиальном направлении. Это вызывает осмофоретическое перемещение растворенных веществ в объеме дегидратируемой капли в соответствии с физико-химическими параметрами и формирование четких, строго индивидуализированных структур, соответствующих состоянию организма, из которого была получена исследуемая жидкость.
8) Поляризационная микроскопия (Рапис Е. Г., 1976; Антропова И. П., Габинский Я. Л., 1997; Савина Л. В., Павлищук С. А., Самсыгин В. Ю. с соавт., 2003) – способ оценки результатов свободного или инициированного кристаллообразования биологической жидкости в поляризованном свете, позволяющий выявить некоторые дополнительные особенности как фации в целом, так и отдельных ее структурных элементов, а также охарактеризовать ее текстуру. Представляет собой универсальную модификацию подхода к визуализации результатов кристаллогенеза и может быть использован как дополнение к любому из кристаллографических методов исследования биосред.
9) Субстратная конгрегация (Г. Г. Коротько, 2000) – вспомогательный кристаллографический метод, позволяющий моделировать кристаллообразование отдельных компонентов, являющихся составляющими биологических субстратов (липидов, белков, полисахаридов). В данном случае, по сравнению с методом «модельных композитов», достигается большее приближение к реальному составу биологической среды по ассортименту, но не по точному соотношению компонентов, однако имеется возможность учета изменений биожидкости по основным ее биохимическим элементам.
10) Жидкокристаллическая термография (Буйко А. С., Цыкало А. Л., Терентьева Л. С. с соавт., 1977; Шкромида М. И., Поспишин Ю. А., 1977) – перспективная методика кристаллографических исследований, принципиальным моментом которой является использование холестерических жидкокристаллических (температурный интервал плавления 33,5-38,20С или 36,8-41,20С) покрытий изучаемых поверхностей системами с холестерилпеларголеатом, холестерилолеатом и т. д. В качестве «подложки» при этом используется кожа, на которую наносится состав. Интерпретация преобразования состояния жидких кристаллов оценивается при помощи специализированного спектрофотометра.
Достаточно широкие диагностические возможности данного методиче-ского подхода в настоящее время практически не используются, несмотря на его очевидную перспективность, простоту и быстроту выполнения.
11) Метод энергоинформационного переноса с биологических жидко-стей на носитель (Воробьев А. В., Воробьева В. А., Нештакова Н. Л. с соавт., 2002) заключается в переносе информации с биосред на «чистые горошины молочного сахара», затем на предметном стекле производится их соединение с 0,1 мл базисного вещества (5% водного раствора медного купороса). Приготовление микропрепаратов выполняется в темном помещении в течение 24 ч. Оценка осуществляется путем качественного анализа получаемых образцов-кристаллизатов.
Такое многообразие методологических вариантов проведения теста, имеющего в своем основании дегидратацию биологических субстратов, связано, возможно, с тем, что использование различных подходов способствует лучшей идентификации получаемых результатов (таблица). Извлечение информации, сокрытой в совокупности метаболитов, их количественном и качественном соотношении в биоматериале, - одна из наиболее значимых и важных задач кристаллоскопической диагностики. С точки зрения многочисленных авторов (Алексеева В. И., 1965; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. с соавт., 1990; Антропова И. П., Габинский Я. Л., 1997; Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. с соавт., 1999; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001, 2004; Алексеева О. П., Воробьев А. В., 2003; Байдаулет И. О., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Савина Л. В., 1999; 2003; Быстревская А. А., Деев Л. А., 2004; Залесский М. Г., Эммануэль В. Л., Краснова М. В., 2004; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Громова И. П., 2005), преимущественная роль в раскрытии метабо-лических сдвигов состава сред организма человека и животных отводится качественному компоненту с учетом детерминированных взаимоотношений между отдельными образованиями (кристаллической и аморфной природы). Количественному же компоненту уделяется значительно меньше внимания, хотя он является четким критерием объективности наблюдаемых различий.

1.2.2.1. Общая характеристика методики тезиокристаллоскопии биологических субстратов

На основании анализа сведений литературы, представленных выше, а также был предложен интегративный метод тезиокристаллоскопии биологических субстратов, базирующийся на одновременном и параллельном выполнении классической кристаллоскопии и сравнительной тезиграфии, осуществляющихся на одном стекле. Это позволяет оценить как способность биологической жидкости к непосредственной кристаллизации, так и ее инициаторный потенциал по отношению к заданному исследователем базисному кристаллообразующему веществу (таблица 1.)

Таблица 1. Сравнительная характеристика некоторых кристаллографических методов

• Экспериментальная часть

• 2.Объекты, цели и методы исследования

• 2.1. Цели, задачи и этапы исследования.

• Целью данного исследования изучение морфологии высушенных образцов мочи здоровых и мышей, больных лимфоидным лейкозом (ЛЛ).
• Для достижения намеченной в работе цели были сформулированы следующие задачи:
• 1. Изучить современную литературу по проблемам кристаллографии биосубстратов.
• 2.Освоить методику выполнения тезиокристаллоскопии биосубстратов.
• 3.Оценить характер кристаллообразования мочи у здоровых мышей.
• 4.Установить особенности инициированного кристаллогенеза мочи мышей при ЛЛ.
• Работа выполнена на базе лаборатории консервирования крови и тканей Кировского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови.
• Этапы исследования:

1. Подготовка здоровых лабораторных мышей линии АКR к исследованиям.
2. Прививка лимфоидной формы лейкоза мышам линии АКR.
3. Забор биосубстрата (мочи) на исследование у здоровых мышей и мышей, имеющих лейкоз.
4. Приготовление микропрепаратов мочи здоровых мышей и мышей, имеющих лейкоз.
5. Тезиграфический анализ высушенных микропрепаратов мочи здоровых мышей и мышей имеющих лейкоз.

• В качестве предмета исследования выступали тезиграфические «паттерны» мочи здоровых мышей и мышей имеющих лейкоз.
• Объектом данного экспериментального исследования служила моча 10 здоровых мышей и 10 мышей имеющих лейкоз.
• В качестве базисного вещества при тезиграфическом тесте мы использовали 10% раствор хлорида натрия, который является активным кристаллообразователем.
• В целом было получено 20 микропрепаратов мочи, взятых от контрольной группы (здоровые мыши), от мышей, имеющих лейкоз(опытная группа).
• Экспериментальная часть работы включала изучение в изучении морфологии высушенных образцов мочи здоровых, больных лейкозом мышей.

2.2 Подготовка посуды и рабочего места

Посуду, используемую в работе (пробирки, пипетки измерительные, предметные стекла), мыли горячей водой с применением моющего средст-ва, ополаскивали сначала водопроводной, затем дистиллированной водой и высушивали.
Стерилизацию посуды, предварительно завернутой в оберточную бу-магу проводили в автоклаве при температуре 120°С и давлении 1 атм в течение 25 мин.
Работы при заборе биологической жидкости проводилась в лаборатории (виварии) животных ФГУ «КНИИГ и ПК» Росздрава. Дальнейшее получение тезиокристаллоскопических фаций сыворотки крови проводили в лаборатории консервирования крови и тканей ФГУ «КНИИГ и ПК» Росздрава. Перед работой помещение облучали кварцевой лампой течение 30 мин. Рабочий стол перед работой и по ее окончании обрабатывали 70% спиртом.

2.3. Применяемые методы исследования

2.3.1 Методика тезиокристаллоскопического теста

Исследование кристаллооптических свойств биосубстратов (сыворотки крови) здоровых и больных лейкозом мышей производилось по методике тезиокристаллоскопии (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005; Мартусевич А. К. с соавт., 2000-2006).
На предварительно обезжиренное, промытое и просушенное предмет-ное стекло наносят образцы биологического материала (сыворотки крови, мочи, слюны, пота, слезы и т. д.) в объеме 0,3 мл, который, как нами уста-новлено ранее, является оптимальным как в ракурсе площади стекла, так и в отношении количества кристаллических и аморфных структур, подлежащих последующему анализу. При этом отличие метода тезиокристаллоскопии состоит в том, что на исследуемое стекло наносят 3 образца (рис. 2.1.), первый (1) из которых содержит только биоматериал, второй (2) - смесь биожидкости и кристаллообразующего (базисного) вещества, третий (3) - контроль кристаллообразующего соединения. В качестве базисного вещества использовался 10% раствор NaCl.

Рис.2.1. Схема препарата, приготовленного по методу тезиокристаллоскопии

Сушка полученного микропрепарата производится модифицированным способом в токе теплого воздуха. При этом горизонтальное положение стекла и соответствующее направление потока должно обеспечивать дегидратацию проб в одинаковых условиях, не допуская их объединения. Затем производится анализ образовавшихся кристаллоскопических картин по традиционной схеме отдельно по кристаллографическому и тезиграфическому компоненту.
Высыхание капли субстрата на смачиваемой поверхности (стекло) приводит к образованию 3 различных зон: наружная (маргинальная – вода, электролиты, низкомолекулярные соединения); внутренняя (центральная – сосредоточены высокомолекулярные белки, электролиты, низкомолекулярные соединения) и промежуточная, отличающаяся наименьшей концентрацией веществ. Внутренняя зона может иметь выраженные и невыраженные границы. Часто к внешнему контуру внутренней границы примыкают кристаллические и аморфные структуры.
Высыхание коллоида сопровождается его ретракцией, нарастанием концентрации низкомолекулярных соединений и образованием кристаллических структур самого разного вида.
Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась в среде Microsoft Excel XP с применением встроенных функций.
Для интерпретации кристаллоскопических картин мы проклассифицировали все встречаемые нами кристаллические и аморфные образования (таблица 2.1, рис. 2). В соответствии с данной классификацией и проводилась оценка препаратов, подготовленных для анализа по методике классической кристаллоскопии. Производилось как общее изучение кристаллоскопических особенностей биожидкости, так и сравнительная их характеристика.

Таблица 2.1.Кристаллические и аморфные структуры, встречаемые при «классическом» кристаллоскопическом анализе биожидкостей

Примечание: * - различаются по количеству (немного – суммарно занимают менее 30% площади поля зрения, умеренное количество – суммарно занимают 30-50% площади поля зрения, большое количество – суммарно занимают более 50% площади поля зрения) и по размеру (мелкие, средние, крупные, агрегаты).
На основании анализа многочисленных микропрепаратов высушенных биологических жидкостей выделено (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005;) 5 классов кристаллических структур, каждый из которых, в свою очередь, включает конкретные образования (таблица 2.1). Для некоторых из них расшифрован химический состав, что позволяет с определенной степенью приближения судить об изменении качественно-количественных характеристик компонентных соотношений в биологических среде в случае динамического исследования кристаллообразующих свойств последней.
Обособленную категорию образуют тела некристаллической природы – аморфные образования. Являющиеся производными карбоната кальция, они чрезвычайно вариабельны по размеру и количеству, что может иметь диагностическое значение.
Интерес также представляет тип взаимодействия крупных кристаллов и аморфных частиц в фации дегидратированного биосубстрата (рисунок 2). Информативность данного феномена не данный момент не установлена, но требует, на наш взгляд, пристального внимания к себе, т. к. может отражать влияние на кристаллогенез кристаллоскопически не визуализируемых составляющих биожидкости (например, белковых макромолекул, жиров, углеводов и т. д.).

Рис. 2.2.Взаимодействия кристаллических и аморфных структур

В целях получения дополнительной информации о физико-химических свойствах анализируемой биологической жидкости были разработаны (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005) дополнительные критерии оценки результата классической кристаллоскопии, включающие следующие параметры:
1. Ячеистость (I) – отражает особенности органико-минеральных взаимодействий в фации. Оценка производится по шестибалльной прямой шкале (0-5 баллов), причем за 0 баллов принято полное отсутствие признаков появления данного явления, а за 5 баллов – просматриваемость ячеистости без микроскопа.
2. Равномерность распределения элементов (R) – критерий, свидетельствующий о правильности протекания процесса свободного кристаллогенеза. Также интерпретируется в соответствии с шестибалльной шкалой (0-5 баллов), приведенной в разделе, посвященном тезиграфическому компоненту.
3. Выраженность краевой зоны (Кз) – параметр, указывающий на наличие и количество белкового компонента биологической среды (Шатохина С. Н., 1995; Назарова Л. О., Шатохина С. Н., Шабалин В. Н., 2000). Нами предлагает схема оценки этого показателя по полуколичественной шестибалльной шкале:
- 0 баллов – абсолютное отсутствие маргинальной зоны, выражены стрии, локальные признаки деструкции в области края фации;
- 1 балл – краевая зона слабо различима при малом увеличении светового микроскопа, наблюдаются единичные «разломы», в том числе нечетко выраженные, «завуалированные»;
- 2 балла – краевая зона хорошо различима, она практически однородна, наблюдается небольшое количество «разломов»;
- 3 балла – краевая зона четко отграничена от промежуточной, однородна, по всему краевому кольцу отмечаются «разломы», не вносящие деструктивный характер;
- 4 балла – краевая зона четко визуализируется, отграничена «валом» от промежуточной, имеет значительно количество «разломов», но без микроскопии неразличима.
- 5 баллов – краевая зона визуализируется без микроскопии, она одно-родна, без признаков деструкции; микроскопия указывает на значительное количество «разломов».
4. Степень деструкции фации (СДФ) – интегральный показатель, отражающий правильность протекания кристаллогенеза (основная качественная характеристика фации) и суммирующая как экзогенные (условия дегидратационного процесса – температура, влажность, давление, скорость потоков воздуха, попадание дополнительных веществ и т. д.), так и эндогенные факторы (термодинамическая составляющая кристаллообразования, наличие адекватного для формирования кристаллогидратов и стабилизации органических макромолекул количества воды и т. д.).
* 0 степень – все элементы фации правильной конфигурации, не разрушены как в целом, так и на отдельных их участках, признаки разрушения текстуры фации отсутствуют;
* I степень – элементы фации имеют начальные признаки разрушения, не наблюдается деструктивных изменений текстуры;
* II степень – визуализируются многочисленные разрушенные или из-мененные структуры, есть локальные нарушения целостности текстуры;
* III степень – все элементы фации разрушены, невозможно различить отдельные части фации и структуры, образец представляет собой бесфор-менную массу аморфного, зачастую окрашенного, материала; отмечаются четкие признаки разрушения текстуры.
В целом моделирование образуемых структур и применение различных критериев оценки будет способствовать более четкой дифференциации изменений кристаллоскопической картины, хотя излишняя "перегрузка" ими приведет к значительному усложнению процесса анализа фации.
В качестве более информативного, чем рассмотренная выше классиче-ская тезиграфия (Тарусинов Г. А., 1994), способа оценки инициирующей способности биологических субстратов нами применялась сравнительная тезиграфия (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2002-2005; Мартусевич А. К. с соавт., 2000-2005), которая включает применение дополнительного контрольного образца чистого базисного вещества в целях нивелирования различных экстернальных условий; дает возможность указывать на направление инициации (активации или депрессии кристаллогенеза кристаллообразователя) и ее выраженность.
Как уже указывалось выше, оценка тезиграфических фаций представляет большее затруднение, чем кристаллоскопических, что связано с однородностью морфологии первой, а, следовательно, если в отношении классической кристаллоскопии уже разработана идентификационная таблица, и дополнительные критерии будут играть лишь уточняющую роль, то в тезиграфическом тесте они выступают на главенствующие позиции (Нефедова Н. Б., Цывенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Каликштейн Д. Б., 1986; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003-2005). В связи с этим, предлагается классификация критериев, которые могут быть использованы при рассмотрении тезиграфических фаций:
I. Основные критерии
- Основной тезиграфический коэффициент Q
- Коэффициент поясности Р
- Коэффициент инициации M
- Соотносительный коэффициент N
II. Дополнительные критерии
равномерность плотности фации (R);
степень ячеистости картины (I);
индекс хаотичности (ИХ)
выраженность отдельных зон кристаллизации (Z)

Выделение вышеописанных критериев позволило сформировать еди-ный математический подход к оценке тезиграфической фации (Мартусевич А. К. с соавт., 2004, 2005), который базируется на верификации значимости каждого из показателей в определении необходимого производного коэффициента.

Пояснения к использованным расчетным коэффициентам:
I. Основные критерии:
Q = A / B, где A - количество центров кристаллизации в опытном образце, ед.; B - количество центров кристаллизации в контрольном образце, ед.
P = d1 / d2, где d1 - радиус минимального пояса кристаллизации, мм; d2 - радиус максимального пояса кристаллизации, мм.

II. Дополнительные критерии:
R - степень равномерности плотности распределения элементов тезигра-фической фации, баллы;
I - степень ячеистости тезиграфической фации, баллы.

Проведенные нами исследования позволили предположить информационную значимость выделенных выше коэффициентов при идентификации тезиграфической фации:
1. Основной тезиграфический коэффициент Q – указывает на степень организации / дезорганизации кристаллогенеза базисного вещества (в большинстве случаев - раствора хлорида натрия изоосмотической концентрации, в естественных нейтральных условиях склонного к образованию типичных дегидратационных структур) под воздействием исследуемого материала.
2. Коэффициент поясности Р – демонстрирует степень разнородности молекулярных масс компонентов изучаемого субстрата.
3. Степень ячеистости картины I - возможно, демонстрирует наличие конгломератов белков различного химического состава и свойств на степень гидрофильности / гидрофобности, а также присутствие жирорастворимых компонентов в водном растворе биосреды.
4. Параметр R - подчеркивает равномерность распределения структур по тезиграфической фации. Может указывать на содержание невизуализируемых компонентов в материале, способных локально вызывать угнетение кристаллогенеза. Может быть взаимосвязан со способом сушки микропрепарата.
По приведенным выше показателям оценки тезиграфической фации была сформулирована краткая градация особенностей регистрации состава тезиграфической фации по дополнительным критериям оценки (Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005):
1. Равномерность плотности распределения кристаллических струк-тур по фации (R):
0 баллов - полная хаотичность фации, наличие разнородных элементов, пустот, мест скопления кристаллических структур, различная ориентация образований в поле зрения.
1 балл - некоторая сгруппированность кристаллов, намечаются единичные участки правильного построения, занимающие менее 30% от общей площади поля зрения, направленность фигур еще хаотичная.
2 балла - наблюдаются четкие "островки" упорядоченности, занимаю-щие от 30% до 50% пространства поля зрения (в каждом из не менее, чем трех изученных), расстояния между элементами в группах приблизительно уравниваются, регистрируется некоторая закономерность направленности структурных образований фации.
3 балла - достаточно значительное число структурных элементов фации (более 50% от общего количества) структурированы, "островки" равномерности переходят в участки сравнительно большой площади. Внутри этих зон наблюдаются правильное расположение и равномерность расстояний между отдельными образованиями. Закономерность направленности элементов и зональность выделяются достаточно четко.
4 балла - большинство элементов фации структурировано (более 75% от общего количества), остальные распространяются "островками" по полю зрения, чаще в маргинальной зоне. Расстояния между отдельными образованиями практически постоянны. Ориентация элементов подчиняется определенной закономерности практически на всей поверхности поля зрения.
5 баллов - все элементы тезиграфической фации четко структурированы на всем поле зрения, что подтверждается рассмотрением нескольких полей. Деление на центральную, интермедиатную и маргинальную зоны четко просматривается даже при визуальном безмикроскопном контроле, можно установить границы последних. Расстояния между элементами картины постоянны, ориентация фигур правильная, закономерная на всей поверхности фации.
2. Степень проявления ячеистости фации (I):
0 баллов - полное отсутствие признаков появления ячеистости, однородность картины, нет выделения "островков" кристаллов. Фации представляют единый "пласт" кристаллических образований.
1 балл - наличие первых признаков неоднородности, "дробления" кристаллоскопической картины (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
начало обособления групп элементов (менее 30% от всех образований, занимающих менее 30% площади поля зрения);
некоторая неоднородность картины;
начало "дробления" единого "пласта" кристаллических фигур.
2 балла - отмечается достаточно просматриваемая тенденция к "дроблению" фации, образованию "островков" кристаллов (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
количество обособившихся элементов в "островках" - от 30% до 50% от всех структур, они занимают более 30% поверхности поля зрения фации;
выраженная неоднородность, зональность картины;
визуализируется процесс "разделения" фации на участки, регистрируются формирующиеся пояса кристаллизации, служащие границами последних, в некоторых случаях не на всех протяжении, толщиной в 1 кристалл.
3 балла - наблюдаются выраженные изменения в фации:
элементы в "островках" составляют от 50% до 75% от общего числа, занимаемая ими поверхность более 50% от поля зрения (по нескольким полям);
выраженная неоднородность, "зернистость" картины;
четко просматривается процесс "расчленения" фации в нескольких полях зрения;
пояса кристаллизации довольно четкие, образованы более чем одним рядом кристаллических структур.
4 балла - достоверно просматривается признаки появления ячеистости (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
число сгруппированных в ячейках структур от 75% до 100% от общего количества последних ;
сгруппированные элементы занимают все поле зрения (при изучении не-скольких, не менее чем трех полей зрения);
пояса кристаллизации образованы более чем одним рядом кристаллов, имеются на всей поверхности поля зрения, окружают "островки" полностью.
5 баллов - картина характеризуется следующими морфологическими признаками (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
число сгруппированных в ячейках структур от 75% до 100% от общего количества последних;
сгруппированные элементы занимают все поле зрения (при изучении не-скольких, не менее чем трех полей зрения);
очень четко выражена "дробность", "зернистость" картины;
пояса кристаллизации образованы более чем одним рядом кристаллов, имеются на всей поверхности поля зрения, окружают "островки" полно-стью;
присутствуют "разломы" картины (кроме фаций сыворотки крови , для которых данный феномен является самостоятельными диагностическим признаком ).

В целом применение описанных выше критериев, показателей и расчетных коэффициентов позволило нам алгоритмизировать процедуру извлечения информационной нагрузки, сокрытой в качественном и количественном составе анализируемых субстратов.
В соответствии с данной схемой анализ производится поэтапно по двум основным направлениям – исследование свободного кристаллогенеза и инициированного кристаллообразования, что позволяет комплексно рассмотреть как непосредственную кристаллообразующую способность биожидкости, так и ее инициаторный потенциал.

Рис. 2.3.Алгоритм оценки тезиокристаллоскопической фации.

Итак, широкое привлечение математического аппарата позволяет мультипараметрически оценивать биологические жидкости по их кристаллогенезу, который дает большой объем информации об их физико-химических свойствах, и, косвенно, качественно-количественном компонентном составе, что, по нашему мнению, представляет особое значение для клинической, прежде всего диагностической, практики и фундаментальной науки.

2.4 Статистическая обработка данных

Фактический материал, полученный при проведении исследований у всех изученных смывов, был обработан методом вариационной статистики (Тюрин Ю. Н., Макаров А. А., 1998; Наследов А. Д., 2004). Вычисляли средние величины (М), их стандартную ошибку (m) и среднеквадратическое отклонение (). Показатели считались достоверными при значениях р<0,05 (по t-критерию Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни). Зависимость между признаками оценивали при помощи коэффициента парной корреляции (r), его ошибки (mr) и уровня значимости различий (по t-критерию Стьюдента). Зависимость считалась сильной при r  > 0,7, средней в случае, если модуль значения парной корреляции лежит в пределах 0,3-0,7. При нахождении величины корреляции, меньшей по модальному значению 0,3, она принималась за слабую. Производилось также вычисление достоверности найденной пар-ной корреляции (р).
Расчеты выполнялись в среде электронных таблиц Microsoft Excel 2003, а также с помощью программных статистических пакетов Primer of biostatistics 4.03 и SPSS 11.0.

3. Результаты исследования.

Непосредственную оценку результатов свободного кристаллогенеза производили с помощью единой идентификационной таблицы, включающей 5 основных классов кристаллических и аморфных веществ (морфометрия), а также дополнительных критериев (степень деструкции фации – СДФ, выраженность ее краевой зоны (Кз) и ячеистости (I), равномерность распределения элементов (R)). Тезиграфическая фация анализировалась с применением системы основных (основной тезиграфический коэффициент Q, коэффициент поясности Р) и дополнительных параметров (аналогичны используемым для классической кристаллоскопии).
Нами изучена динамика свободного и инициированного кристаллогенеза мочи у здоровых и больных лейкозом мышей.

3.1. Морфология мочи здоровых и искусственно зараженных лейкозом мышей.

Проведенный нами анализ микропрепаратов высушенных образцов мочи позволил установить четкие «паттерны» для рассматриваемых со-стояний.
Выполнялось сопоставление кристаллоскопических картин, получен-ных от здоровых и больных животных.

Таблица 3.1. Кристаллоскопическая характеристика мышей здоровых и больных лейкозом.

В соответствии с данными, приведенными в таблице 3.1, очевидно, что наблюдаются четкие вариации кристаллоскопической картины между контрольной и опытной группой.

По результатам визуальной морфометрии установлено, что имеют место существенные особенности кристаллоскопической картины мочи больных лейкозом мышей в сравнении со здоровыми животными, в числе которых наиболее значимыми являются:
увеличение количества дендритов у больных мышей, за исключением полного отсутствия линейчатых поликристаллических структур, что является подтверждением изменений, зарегистрированных по одиночно-кристаллическому компоненту;
концентрирование аморфных образований, заключающееся в их укрупнении и снижении количества, их подчеркнутая отграниченность от крупных кристаллических фигур;
увеличение степени деструкции фации (основной показатель не-стабильности кристаллоскопической фации);
снижение равномерности распределения кристаллических и аморфных образований в микропрепарате, сопровождаемое дезагрегацией элементов фации, проявляющейся в достоверном увеличении степени ячеи-стости (p<0,05).
По результатам оценки кристаллообразующей способности сыворотки крови мышей был сформирован «паттерн», характерный для здоровых мышей и мышей, имеющих лейкоз.

3.2. Основные критерии оценки тезиграфических фаций сыворотки крови у мышей в норме и при патологии (лейкоз).

Исследование предусматривало как поиск качественных маркеров лей-коза, так и формирование количественных «паттернов» тезиграфии. Сово-купность диагностически значимых качественных параметров составлялась на основании обнаружения признаков патологических изменений в моче больных мышей.
В соответствии с данными, представленными на рис. 2.4, наиболее зна-чимыми дифференцирующими показателями тезиграмм мочи здоровых мышей и мышей больных лейкозом при использовании в качестве базисного вещества 10% раствора хлорида натрия являются:
- характер инициации биологической средой базисного вещества (у здоровых мышей – выраженная активация кристаллогенеза базисного вещества, у больных мышей, имеющих лейкоз– умеренное ингибирование);
- неодинаковый органико-минеральный состав биожидкости (преобладание минеральных компонентов – у здоровых мышей и превалирование органических соединений – у больных лейкозом мышей);
- степень деструкции фации, которая незначительно выше у представи-телей опытной группы;
- расширение краевой зоны в фациях больных лейкозом мышей при значительной ее выраженности у практически здоровых лиц, что является предполагаемым маркером лейкоза.

Таблица 3.2. Сравнительная тезиграфия мочи здоровых мышей и мышей, имеющих лейкоз (базисное вещество – 10% раствор хлорида натрия)

Примечание: «*» – достоверность различий по отношению к контрольной группе p<0,05

Рис. 2.4. Изменение основных и дополнительных критериев тезиграфии мочи у больных лейкозом мышей по сравнению со здоровыми

3.3 Мыши линии AKR

Высоколейкозная линия мышей AKR получена в результате скрещивания близкородственных особей в 1928 г. Мыши обоих полов подвержены лимфоидной лейкемии. Около 91% самок погибают от лейкозов к 300 дню.

3.4 Динамика развития лейкоза.

Рис. 3.1 Фация однородная, нет выраженных образований – здоровая мышь X40

Рис. 3.2 Фация однородная, появляются первые признаки дробления краевой зоны – первые признаки развития лейкоза, возраст 5 мес. X40

Рис. 3.3 Неоднородность структуры, слабая выраженность краевой зоны, проявление ячеистости – начало развития лейкоза. 7 мес. X40

Рис. 3.4 Начало появления линейчатых дендритных структур – развитие лейкоза. 8 мес. X40

Рис. 3.5 В структуре фации преобладают линейчатые и прямоугольные дендритные структуры – развитый лейкоз, 9 мес. X40

Рис. 3.6 Выраженная ячеистость фации, неравномерная плотность распределения элементов – сильно развитый лейкоз. 13 мес. X40

3.5 Выводы

На основании обнаружения на фации сухой капли мочи нескольких качественных параметров (не менее 3) опытной биопробы представляется возможным выявить наличие патологических изменений или степень развития острого лейкоза.
Используя данные, приведенные в таблице 3.2, можно отметить, что в отношении коэффициентов Q и Р регистрируются достоверные различия его значений в тезиграммах мочи.
В соответствии с данными, представленными в таблице 3.2, достовер-ность различий между основными показателями тезиграфии подтверждает значимость обнаруженных с помощью качественных признаков особенностей тезиграфической фации мочи.
Таким образом, использование метода сравнительной тезиграфии мочи у здоровых мышей и мышей, имеющих лейкоз, позволяет выявить качественные и количественные маркеры присутствия лейкоза.
Тезиокристаллоскопический анализ биожидкостей позволяет осуществлять мультипараметрическую оценку содержащейся в них метаболической информации, что может быть полезно при индикации физиологических и патологических состояний человека и животных. Каждая биожидкость обладает своими особенностями кристаллогенеза, что связано с дифференцированностью их химического состава и выполняемых функций.
При изучении кристаллоскопического компонента реко-мендуют использовать единую идентификационную таблицу, а тезиграфического - основные (коэффициенты Q и Р) и дополни-тельные (равномерность распределения картины, ячеистость и т. д.) критерии оценки. Продолжение исследований будет служить развитию представлений о суб- и молекулярных механизмах развития физиологических и патологических реакций организма человека.

Список использованной литературы:

1. Агафонов В. А., Багров С. Н. Исследование состояния стекловидного тела методом высушивания // Сб. научных статей «Трансцилиарная хирургия хрусталика и стекловидного тела». – Москва. – 1982. – С. 158-164.
2. Алексеева О. П., Воробьев А. В. Кристаллография слюны – новый неинвазивный метод диагностики H. pylori // Нижегородский медицинский журнал. – 2003. - №2. – С. 73-78.
3. Антропова И. П., Габинский Я. Л. Кристаллизация биожидкости в за-крытой ячейке на примере слюны // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - №8. - С. 36-38.
4. Бабенко Г.А. Злокачественный рост, металлы и хелатирующие агенты. Биологическая роль микроэлементов. - М.: Наука, 1983.
5. Барер Г. М., Денисов А. Б., Михалева И. Н. с соавт. Кристаллизация ротовой жидкости. Состав и чистота поверхности подложки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1998. – Т. 126, №12. – С. 693-696.
6. Безопасность жизнедеятельности. Безопасность технологических про-цессов и производств (Охрана труда). Уч. пособие для вузов/П. П. Кукин и др. – М., 1999.
7. Браун Г., Уолкен Дж. Жидкие кристаллы и биологические структуры. М.: Мир, 1982. – 198с.
8. Бубон Н. Т., Пузыревский К. Я. Микрокристаллоскопическая реакция обнаружения папаверина // Аптечное дело. – 1965. - №2. – С. 50-52.
9. Бузоверя М. Э., Шишпор И. В., Шатохина С. Н. с соавт. Морфометрический анализ фаций сыворотки крови // Клиническая лабораторная диагностика. - 2003. - №9. - С. 22-23.
10. Быстревская А. А., Деев Л. А. Зависимость структуропостроения слезной жидкости от вида раздражителя и качества подложки // Материалы III Всероссийской научно-практической конференции «Функциональная морфология биологических жидкостей». – Москва. – 2004. – С. 17-19.
11. Вегман Е. Ф., Руфанов Ю. Г., Федорченко И. Н. Кристаллография, минералогия, петрография и рентгенография. М.: Металлургия, 1990. – 263с.
12. Волчецкий А. Л., Рувинова Л. Г., Спасенников Б. А. с соавт. Кристаллизация и кристаллография: медико-биологические аспекты. Архангельск, 1999. – 374с.
13. Волчецкий А. Л., Спасенников Б. А., Агафонов В. М. с соавт. Модификация метода и компьютерное направление тезиграфического анализа // Экология человека. – 1999. – №3. – С. 38-42.
14. Воробьев А. В., Воробьев П. В., Воробьева В. А. Определение энергоинформационной составляющей человека с помощью метода чувствительной кристаллографии // Тез. докладов XI Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – Москва. –2001. – С. 202-207.
15. Воробьева В. А., Воробьев А. В., Замаренов Н. А. Закономерность формирования кристаллографической картины при взаимодействии биологической жидкости человека и гомеопатического препарата с кристаллообразующим раствором / Открытие. – Диплом РАЕН №231. (Приоритет от 8.06.2002).
16. Голубев С. Н. Живые кристаллы // Природа. – 1989. - №3. – С. 13-21.
17. Гордиенко А. Н., Курбатова Л. А., Филиппов А. Н. // Физика кристаллизации. – Калинин. – 1985. – Вып. 8. – С. 83-86.
18. Громова И. П. Кристаллоскопический способ изучения сыворотки крови в токсиколого-гигиеническом эксперименте методом «открытая капля» // Гигиена и санитария. – 2005. – №2. – С. 66-69.
19. Гуляев В. Г., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Особенности и перспективы применения кристаллографических методов исследования в криминалистике // Мат. межвузовской научно-практической конференции с Интернет-участием "Актуальные вопросы криминалистики и экспертной деятельности: проблемы и перспективы". - Киров: КФ МГЮА. - 2004. – С. 35-39.
20. Гуляева С. Ф., Мартусевич А. К., Помаскина Т. В. Математическое моделирование результата инициированного кристаллогенеза слюны как критерий эффективности приема минеральных вод // Экология человека. – 2005. – №7. – С. 33-35.
21. Де Же В. Физические свойства жидкокристаллических веществ. М.: Мир, 1982. – 175с.
22. Дерябина Н. И., Залесский М. Г. Содержание белковых компонентов в капле сыворотки крови при ее высыхании // Вестник новых медицинских технологий. – 2005. – Т. XII, №1. – С. 85-87.
23. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У. с соавт. Справочник биохимика. М.: Мир, 1997. - 544с.
24. Замкова Н. Г., Зиненко В. И. Динамика решетки ионных кристаллов в модели дышащих и поляризуемых ионов. // ФТТ. - 1998. - Т. 40, № 2. - С. 350-354.
25. Зайцев В.В., Зайцева Н.Б., Усольцева Н.В. Текстуры биологических жидких кристаллов больных инфарктом миокарда // Известия Академии наук. Серия физическая – 1996. - т.60, №4 – С. 115-118.
26. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Исследование фазовых переходов и несо-размерной фазы в кристаллах АСВХ 4 методом Монте-Карло. // Кри-сталлография. - 2000. - Т. 45, № 3. - С. 513-517.
27. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Микроскопические расчеты структурных фазовых переходов типа смещения (кристаллы со структурой эльпасолита) и типа порядок-беспорядок (семейство сульфата калия). // Кристаллография. - 2004. - Т. 1, №1. – С. 38-45.
28. Иванов О. В., Шпорт Д. А., Максимов Е. Г. Микроскопические расчеты сегнетоэлектрической неустойчивости в перовскитных кристаллах // ЖЭТФ - 1998. – Т. 114, № 1. - С. 333-358.
29. Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. с соавт. Кристаллографическое исследование биологических субстратов // Клиническая медицина. – 1990. - №4. – С. 28-31.
30. Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Черняков В. Л. Значение тезиграфиче-ского метода исследования мочи // Лабораторное дело. – 1981. - №2. – С. 79-81.
31. Калинин А.П. и др. Информативность метода кристаллических налетов сыворотки крови при некоторых эндокринных заболеваниях // Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции. "Кристаллографические методы исследования в медицине", Москва - 1997. - С. 131-133
32. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. К методике тезиокристаллоскопии биожидкостей // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - №10. - С. 3.
33. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Современные подходы к кристалло-скопической идентификации состава биологических жидкостей // Экология человека. - 2003. - №5. - С. 23-25.
34. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Характеристика тезиокристаллоскопического портрета биологических жидкостей организма человека в норме и при патологии // Вестник новых медицинских технологий. - 2003. - Т. X, №4. - С. 57-59.
35. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., Колеватых Е. П. О первичной и вторичной биокристаллизации // Сб. научных работ «Естествознание и гуманизм». – Томск. – 2005. – Т. 2, №1. – С. 18-19.
36. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Перспективы развития кристаллографических методов исследования // Вятский медицинский вестник. - 2003. - №3. - С. 6-11. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К. Характеристика тезиокристаллоскопического портрета биологических жидкостей организма человека в норме и при патологии // Вестник новых медицинских технологий. 2003. Т. X. № 4. С. 57–59.
37. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. В 2 т. Минск: Беларусь, 2000. Т.1. 495с.; Т.2. 463с.
38. Каркищенко Н. Н. Основы биомоделирования. М.: Изд-во ВПК, 2004. – 608 с.
39. Карачунский А.И. Острый лимфобластный лейкоз у детей. Лекции по актуальным проблемам педиатрии. Под ред. В.Ф.Демина, С.О.Ключникова., М: РГМУ; 2000.
40. Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н. Тезиографические исследования крови и их практические возможности // Вестник новых медицинских технологий. – 2004. – Т. XI, №1-2. - С. 23-25.
41. Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. Физические основы кристаллографического анализа в офтальмологии // Сб. тез. докладов межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием "Санкт-Петербургские научные чтения-2002". - СПб. - 2002. - С. 42-43.
42. Колотилов Н. Н., Бакай Э. А. Жидкокристаллическая структура биологических объектов // Молекулярная биология. – 1980. – Вып. 27. – С. 87-96.
43. Кононенко Е. В., Миронов Е. В. Дислокационно-дисклинационные ме-ханизмы преобразования текстуры биожидкости при агрегировании // Сб. научных трудов 2-й всероссийской научно-практической конференции «Морфология биологических жидкостей в диагностике и контроле эффективности лечения». – Москва. – 2001. – С. 21-26.
44. Кораго А. А. Введение в биоминералогию. СПб.: Недра, 1992. – 280с.
45. Кошкин А. Н., Мартусевич А. К., Лопатин М. А. Кристаллоскопия биожидкостей организма человека как метод диагностики // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2002. - №1. – С. 134.
46. Кристаллографические методы исследования в медицине: Сб. науч. трудов 1-й Всероссийской научно-практической конференции. - М., 1997.
47. Кристаллоскопический метод исследования биологических субстратов: Метод. рекомендации / Л. А. Мороз, И. Л. Теодор, В. Е. Брык с соавт. – М., 1981. – 9с.
48. Кузнецов В. Д. Кристаллы и кристаллизация. М., 1954. – 65с.
49. Кузнецов А. В., Речкалов А. В., Смелышева Л. Н. Желудочно-кишечный тракт и стресс. Курган: Изд-во Курганского государственного университета, 2004. – 254с.
50. Кузнецов Н. Н., Вершинина Г. А., Скопинов С. М. с соавт. Оптико-поляризационные и рефрактометрические методы в оценке степени тя-жести синдрома эндогенной интоксикации у детей // Сб. научных трудов 2-й всероссийской научно-практической конференции «Морфология биологических жидкостей в диагностике и контроле эффективности лечения». – Москва. – 2001. – С. 30-33.
51. Кузнецов Н. Н., Скопинов С. А., Вершинина Г. А. с соавт. Кристалло-скопический способ диагностики эндогенной интоксикации у детей. Патент РФ №2158923 от 04.03.1998 г.
52. Кунгуров Н. В., Кохан М. М., Кононенко Е. В. с соавт. Кристаллографические исследования биологических жидкостей у больных хроническими дерматозами. Екатеринбург, 1997. – 41с.
53. Курнышева Н. И., Деев А. И., Грызунов Ю. А. с соавт. Способ оценки инволюционного офтальмоэндотоксикоза путем флуоресцентного ис-следования слезной жидкости // Вестник офтальмологии. – 2000. – №3. – С. 16-19.
54. Лобанов В. И. Микрокристаллоскопические реакции обнаружения некоторых производных барбитуровой кислоты // Журнал аналитической химии. – 1966. - №1. – С. 110.
55. Локтюшин А. А., Манаков А. В. Минералы и жизнь в голографической модели вещества // Тез. 2-го Международного семинара «Минералология и жизнь: биоминеральные взаимодействия». – Сыктывкар. – 1996. – С. 10-11.
56. Мартусевич А. К. Кристаллоскопические методы исследования в физиологии // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. – 2004. – Т. 90, №8. – С. 18.
57. Мартусевич А. К. Информационная физико-биохимическая теория кристаллизации как отражение морфологии биологических жидкостей // Бюллетень сибирской медицины. – 2005. – Т. 4. – Приложение 1. – С. 185.
58. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Проблемы исследовательского подхода в кристаллографии биожидкостей // Мат. третьей междисциплинарной конференции с международным участием «НБИТТ-21». – Петрозаводск. – 2004. – С. 50.
59. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Особенности воздействия условий проведения кристаллизации биологических жидкостей организма человека на результат тезиокристаллоскопического теста // Сб. науч. статей молодых ученых и специалистов РФ, посвященный конференции им. акад. Б. С. Гракова "Актуальные вопросы медицины и новые технологии-2003". - Красноярск. - 2003. - С. 154-157.
60. Мартусевич А. К., Пономарева Г. Л. Математические способы иденти-фикации тезиграфических фаций с применением оценочного числа у больных поясничным остеохондрозом // Клиническая лабораторная диагностика. – 2004. - №9. – С. 85-86.
61. Меньшиков В. В. Лабораторные тесты в клинической практике. М.: Медицина, 1988. - 428с.
62. Микрометод определения свободных аминокислот в сыворотке крови при помощи хроматографии на бумаге // Медицинские лабораторные технологии. СПб., 1999. – Т. 2. – С. 106-108.
63. Мороз Л. А., Каликштейн Д. Б. Кристаллографический метод исследования биологических субстратов. Методические рекомендации. М., 1986. – 24с.
64. Мушкамбаров Н. Н. Физическая и коллоидная химия: Курс лекций. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – 384с.
65. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М.: Медицина, 2000. – 544 с.
66. Никольская М. Н., Гандель В. Г., Попков В. А. Обнаружение сульфаниламидных препаратов методом кристаллизации в тонком слое // Аптечное дело. – 1965. - №4. – С. 13-14.
67. ПБ 10-115-96. Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов работающих под давлением.
68. Пикин С. А. Структурные превращения жидких кристаллов. - М. - 1981. - 269с.
69. Плаксина Г. В., Комолова Г. С., Машков А. Е. с соавт. Стабилизирую-щий эффект ангиогенина из молока на кристаллическую структуру биологических жидкостей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2003. – Т. 136, №10. – С. 406-409.
70. Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. с соавт. Клиническое значение кристаллографического и кристаллоскопического метода исследования мочи // Клиническая лабораторная диагностика. – 1999. - №10. – С. 34.
71. Пригожин И., Стенгерс И. Порядок из хаоса / Пер. с англ. М.: Прогресс, 1986. – 429с.
72. Рапис Е. Г. Микрокристаллооптический способ использования стекло-видного тела человека и животных в норме и при гемофтальме // Вест-ник офтальмологии. – 1976. – №4. – С. 62-67.
73. Рапис Е. Г. Белок и жизнь. Самоорганизация, самосборка и симметрия наноструктурных супрамолекулярных пленок белка. М.: «МИЛТА - ПКП ГИТ», 2003. – 368с.
74. Романов Ю. А. Теория биологических систем и проблема их временной организации // Проблемы хронобиологии. – 1992. – №3-4. – С. 105-123.
75. Савина Л. В. Кристаллоскопические структуры сыворотки крови в клинике внутренних болезней: Автореф. дисс... д. м. н. - Пермь, 1992. - 40с.
76. Савина Л. В. Кристаллоскопические структуры сыворотки крови здорового и больного человека. Краснодар, 1999. – 238с.
77. Савина Л. В. Структурообразование сыворотки крови в условиях вакуума // Клиническая лабораторная диагностика. – 1999. - №11. – С. 48.
78. Савина Л. В., Конуева О. В., Коротько Г. Г. с соавт. Кристаллоскопическая диагностика нарушений экзокринной функции поджелудочной железы у больных с хроническим панкреатитом / IV Международный конгресс "Парентеральное и энтеральное питание". - Москва, 2000. - С. 98.
79. Савина Л. В., Павлищук С. А., Самсыгин В. Ю. с соавт. Поляризационная микроскопия в диагностике обменных нарушений // Клиническая лабораторная диагностика. - 2003. - №3. - С. 11-13.
80. Салтыков А. Б. Морфологические аспекты процесса образования функциональных систем // Успехи современной биологии. – 2005. – Т. 125, №2. – С. 167-178.
81. Скальный А.В., Есенин А.В. Мониторинг и оценка риска воздействия свинца на человека и окружающую среду с использованием биосубстратов человека // Токсикологический вестник. №6, 1996. - С. 16-23.
82. Скопинов С. А. Компьютерное моделирование кристаллизации соли из биожидкостей.// Кристаллографические методы исследования в медицине. Сб. научн. трудов 1-й Всероссийской научно-практической конференции. . М., 1997. . с. 33.36
83. Смотрова С.П., Чеснокова С.М. и др. Селеновый дефицит в условиях загрязнения окружающей среды // Материалы III международной научно-технической конференции "Физика и радиоэлектроника в медицине и биотехнологиии" – Владимир, 1998. – С. 304-305.
84. Собурь С.В. Пожарная безопасность электроустановок: Справ./С. В. Собурь.- М., 2003.
85. Сонин А. С. Введение в физику жидких кристаллов. М., 1989. – 369с.
86. Средства индивидуальной защиты: Справ. пособие/С. Л. Каминский. – Л., 1989.
87. Суровкина М. С., Шатохина С. Н., Суровкин В. А. с соавт. Изменения уровня молекул средней массы и системной организации плазмы крови у больных пожилого возраста // Сб. научных трудов 2-й всероссийской научно-практической конференции «Морфология биологических жидкостей в диагностике и контроле эффективности лечения». – Москва. – 2001. – С. 18-20.
88. Тарасевич С. Ю. // Журнал технической физики. – 2001. – Т. 71, Вып. 5. – С. 123-125.
89. Тарусинов Г. А. Кристаллографическое исследование мочи в диагностике и дифференциальной диагностике диффузных заболеваний соединительной ткани у детей // Педиатрия. – 1994. - №1. – С. 55-57.
90. Текуцкая Е.Е., Софьина Л.И. и др. Методы и практика контроля содержания тяжелых металлов в биосредах. // Гигиена и санитария – 1999-№4–С.72-74.
91. Тезиокристаллоскопическое исследование биологических субстратов: Методические рекомендации / Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. – Ки-ров, 2005. – 34с.

Как известно, биологические жидкости являются базисной матрицей живой материи. В физиологических, экстремальных и патологических состояниях происходят постоянные изменения молекулярного состава биологической жидкости и характера взаимодействия различных ее компонентов. Это в полной мере относится и к слюне. В литературе имеется большое число работ, посвященных исследованию изменения микрокристаллизации слюны при поражениях твердых тканей зуба (П.А. Леус, 1977; Е.В. Боровский, П.А. Леус, 1979; Г.Д. Овруцкий, В.К. Леонтьев, 1986; Ю.М. Максимовский, 1981; Т.Л. Рединова, 1989; Г.М. Барер и соавт., 1998; Т.М. Еловикова, 1999; Г.М. Барер и соавт., 2002 и др.). Установлено, что существуют определенные диагностические критерии кристаллообразования при различных заболеваниях организма. Между тем, в литературе имеются лишь единичные работы, посвященные изучению этого эффекта при поражениях слюнных желез (Е.М. Майстренко, 2003).

Цель работы исследовать характер кристаллизации протоковой слюны у пациентов с острыми, обострившимися хроническими и хроническими сиаладенитами в зависимости от тяжести процесса, длительности заболевания и динамику ее изменения в процессе лечения.

Под наблюдением находилось 34 пациента, из них мужчин 6, женщин 28. По характеру процесса: острых сиаладентов 19, хронических 15. По поражению желез: околоушных 30, поднижнечелюстных 4.

У всех больных проводили забор нестимулированной протоковой слюны с помощью эластического катетера, каплю слюны помещали на предметное стекло; препарат высушивали методом «выветренных налетов солей». Затем осуществляли микроскопическое изучение типа микрокристаллизации. Забор слюны проводили в день обращения, а затем на 3-и, 7-е, 10-е сутки болезни.

При оценке препаратов выявлено, что у больных с острыми воспалительными заболеваниями слюнных желез в подавляющем большинстве случаев доминирует III тип кристаллизации. Картина кристаллизации слюны в этом случае характеризовалась хаотично расположенными изометрическими структурами неправильной формы по 290 всей поверхности капли и особенно это выражено при остром гнойном сиаладените у 17 пациентов (47,8%). Лишь у 2 больных (7,5%) наблюдался II тип кристаллизации. При этом кристаллопризматические структуры, сохраняя форму меньшего размера, располагались одиночно в центре капли, по периферии же определялись в большом количестве кристаллы неправильной формы. При хроническом сиаладените выявлен III тип кристаллизации у 8 больных (23,4%) и II тип кристаллизации у 6 человек (17,9%). Второй тип кристаллизации наиболее характерен для больных с острым серозным и хроническим интерстициальным сиаладенитом.

При анализе характера кристаллизации смолы у больных с воспалительными заболеваниями слюнных желез отмечена ее зависимость от тяжести и длительности заболевания. При легком течении заболевания, которое достаточно быстро купировалось в процессе лечения, наблюдался II тип кристаллизации. При тяжелом процессе с нарушением общего состояния или при затяжном хроническом процессе с длительным течением выявлен III тип кристаллизации.

Таким образом, оценка кристаллизации слюны позволяет определять динамику воспалительного процесса слюнных желез, а также эффективность проводимого лечения.

Глава 1. СЛЮНА КАК БИОМАТЕРИАЛ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ (Обзор литературы).

1.1. Состав и свойства слюны и ротовой жидкости при некоторых патологических состояниях.

1.2. Кристаллографические исследования биожидкостей.

1.3. Общие сведения о кристаллографии и свойствах кристаллов.

1.4. Жидкокристаллическая структура слюны.

1.5. Компоненты слюны, влияющие на ее структурную и кристаллобразующую функцию.

1.6. Экспериментальные и клинические данные о взаимном влиянии изменений слюнных желез и органов желудочно - кишечного тракта.

Глава. 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Материалы исследования.

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Кристаллизация ротовой жидкости в различные фазы менструального цикла у женщин.

3.2. Кристаллизация ротовой жидкости в норме.

3.3. Кристаллизация ротовой жидкости у больных с патологией желудочно-кишечного тракта.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации по теме "Стоматология", Стурова, Татьяна Михайловна, автореферат

Актуальность проблемы. В литературе последних лет обсуждается вопрос возможности диагностики различных патологий по морфологии микрокристаллизации, которая возникает при заболеваниях в результате изменения состава различных биологических жидкостей (Махачева З.А., 1994; Теодор И. Л. и соавт., 1983; Харченко C.B. и соавт., 1988). Для установления правильного диагноза при различных видах патологии (воспалительных, опухолевых, сосудистых заболеваниях, болевых синдромах и др.). В качестве дополнения к другим диагностическим методам используется кристаллографический метод исследования, суть которого состоит в анализе кристаллов, образующихся при высушивании различных биологических жидкостей (Deams 1964, Неретин В.Я., Кирьяков В.А., 1977; Мороз J1.A. и др., 1981). Этот метод нашел применение в фармакологии (Фигуровский H.A., Борисова В.Г., 1957), в судебной медицине (Степанов A.B., 1951; Швайкова М.Д., 1959) и др.

Кристаллографический метод уже применяется в стоматологии. Наибольшее количество работ по этой тематике выполнено с ротовой жидкостью (РЖ), что объясняется легкостью её получения. С помощью кристаллографического метода изучался патогенез ряда стоматологических заболеваний: кариес, (Леус П.А., 1977, 1983; Токуева Л.И., Кузьмина Л.Н, 1990), красного плоского лишая (Ярвиц A.A., 1994).

Известны два способа получения кристаллических структур: метод высушивания биологической жидкости на подложке (Леус П.А., 1976, 1988; Писчасова Г. К.,1983; Токуева Л.И., Кузьмина Л.Н., 1990; Zajacr и Suveges,1970; Tabbara и Okumoto, 1982); метод тезиграфии, основанный на изучении форм кристаллов, кри-сталлообразующего вещества (NaCl, CuC122H20 или спиртовой раствор яичного лецитина) при добавлении к нему биологических субстратов (Неретин В.Я., Кирьяков В.А., 1977; Тимофеев A.A.,1986; Савина Л.В., Гольдфелью Н.Г., Кострова Ю.А., 1987; Гугутишвили-Ц.Г., Симонишвили

Л.М., 1990). Вместе с тем, анализ выполненных работ свидетельствует о несопоставимости результатов, на основании использовавшихся методов получения кристаллических структур, не разработаны критерии описания результатов, данные противоречивы, что вызывает необходимость в новых методических исследованиях.

Цель исследования

Определить возможность и оптимальные условия диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) (язвенная болезнь желудка, язвенная болезнь 12-перстной кишки, хронический панкреатит, хронический гастрит, хронический гастродуоденит) по оценке фигур кристаллизации слюны.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние заболеваний желудочно-кишечного тракта на морфологию кристаллизации слюны.

2. Выбрать оптимальную методику исследования кристаллизации смешанной слюны женщин детородного возраста.

3. Выявить основные морфологические типы кристаллизации слюны у практически здоровых лиц и больных, страдающих заболеванием желудочно-кишечного тракта.

4. Сравнить возрастные и половые характеристики кристаллизации слюны у практически здоровых лиц (контрольная группа).

5. Предложить для диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта методику исследования кристаллизации слюны.

6. Изучить возможность дифференциации заболеваний желудочно-кишечного тракта по морфологическому типу кристаллизации слюны.

Научная новизна и практическая значимость.

Впервые создана экспертная характеристика микрокристаллов смешанной слюны у лиц с практически здоровой полостью рта («природная санация»).

Установлено, что при некоторых заболеваниях ЖКТ в смешанной слюне появляются кристаллические агрегаты с новыми характеристиками, которых нет в норме. помощью многомерного статистического анализа кристаллические агрегаты смешанной слюны успешно разделяются на норму и патологию, при некоторых заболеваниях (язва желудка, хронический гастрит) кристаллические агрегаты образуют самостоятельные группы что может служить диагностическим критерием.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр госпитальной терапевтической стоматологии, патофизиологии стоматологического факультета МГМСУ.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс и клиническую практику кафедры госпитальной терапевтической стоматологии, на дневном и вечернем отделении стоматологического факультета, на курсах повышения квалификации врачей -стоматологов и преподавателей ФПДО МГМСУ.

2. Вариабельность кристаллических агрегатов ротовой жидкости в норме. //Российский стоматологический журнал, 2003, № 1, С.33-35 (Соавт. Г.М. Барер, А.Б.Денисов)

3. Кристаллические агрегаты ротовой жидкости у больных с патологией желудочно-кишечного тракта //Российский стоматологический журнал, 2003, № 2, С.9-11 (Соавт. А.Б.Денисов, Г.М. Барер, И.В.Маев)

Основные положения, выносимые на защиту диссертации.

1. Дендровидные и другие микрокристаллы смешанной слюны могут быть экспертно описаны как количественно, так и качественно.

2. Использование многомерной статистики позволяет четко разделить кристаллографическую картину нормы и патологии.

3. Кристаллографическая картина смешанной слюны оценивается при строгом соблюдении и учете условий кристаллизации у женщин детородного возраста фазы менструального цикла (эстрогенная фаза).

4. Кристаллографическая картина «нормы» не зависит от пола и возраста.

При некоторых хронических заболеваниях ЖКТ (язва желудка, хронический гастрит) образуется нозологически-специфичный набор вариантов микрокристаллов, что может использоваться для диагностических целей.

Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности кристаллизации слюны при заболеваниях органов пищеварения"

1. Разработан алгоритм и система оценки кристаллов смешанной слюны, позволяющие проводить диагностику заболеваний ЖКТ с использованием метода многомерного дискриминантного анализа.

2. В процессе кристаллизации слюны у практически здоровых лиц образуется не менее 1-2 видов кристаллов и 13-15 вариантов дендритных кристаллов, 6 признаков дендритных кристаллов постоянно присутствуют в нормальных кристаллограммах и могут определяться количественно, остальные признаки - качественные: да/нет.

3. При ряде заболеваний ЖКТ (хронический панкреатит, хронический гастрит, хронический холецистит, хронический гастродуоденит, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, язвенная болезнь желудка) в процессе кристаллизации смешанной слюны наряду с признаками, присутствующими в норме, появляются новые качественные признаки.

4. Экспертное описание кристаллографической картины нормы не зависит от пола и возраста.

5. В результате проведения кластерного анализа (построения дендрограммы) произошло достаточно выраженное разделение практически здоровых лиц (норма) и больных с патологией ЖКТ: в один кластер группируются не менее 75% здоровых лиц.

6. При использовании метода многомерного дискриминантного анализа, выявлено, что при патологии ЖКТ, четыре группы из шести заболеваний четко разделяются между собой. В самостоятельную группу явно выделяются кристаллограммы больных с язвой желудка и хронического гастрита. Остальные классы менее информативны.

7. Установлено, что по отдельно взятым признакам невозможно добиться окончательной постановки диагноза. Налицо многомерная статистическая задача, когда только совокупное взаимодействие признаков криталлизации слюны позволяет разделить норму от патологии, а также отдельные виды патологий между собой.

1. Для получения унифицированных кристаллических агрегатов смешанной слюны необходимо использовать пластиковую чашку Петри (пластмасса лабораторная ТУ 64-2-19-79) диаметром 40 мм, производства завода медицинских полимеров Ленинград.

2. Процесс кристаллизации смешанной слюны человека следует проводить в одинаковых температурных и других условиях.

3. У женщин детородного возраста необходимо учитывать фазу менструального цикла (эстрогенная фаза).

4. Для анализа видеофайлов следует выбирать «центральную» зону кристаллизации высушенной капли смешанной слюны на пластиковой чашке Петри.

5. Экспертный анализ изображений необходимо проводить в наиболее характерных участках с использованием графических программ типа Photoshop для обработки файла.

6. Для анализа полученных данных применять электронные таблицы и многомерный статистический анализ (дискриминантный или кластерный).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Стурова, Татьяна Михайловна

1. Артамонов В А. Состояние полости рта и соотношения секреторной активности слюнных желез и фундальных желез желудка у больных с язвенной болезнью: Дис. . канд. мед. Наук. Краснодар, 1984.-161с.

2. Бабаева А.Г., Шубникова Е.А. Структура функции и адаптивный рост слюнных желез -М.: изд. МГУ, 1979. 189с.

3. Бабкин Б.П. Секреторный механизм пищеварительных желез JL, 1960. -120с.

4. Баевский P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы и патологии. М.Медицина.- 1979.- 298 с.

5. Барер Г.М., Денисов А.Б., Михалева И.Н., Ревокатова И.П.//Пробл. ней-ростомат. и стоматол. 1998.-№1.- С.4-6

6. Безуглов М.Р., Ронь Г.И. Опыт диспансеризации больных с болезнью и синдромом Шегрена //Тез. доклада годичной научно-Практической конф. врачей областной клинической больницы.Свердловск, Т 1 .1988. -С.5-6.

7. Белова A.B. Микрокристаллоскопическое обнаружение некоторых производных барбитуровой кислоты при судебно-химических исследованиях//Судебно-мед.экспертиза.- 1960. №2.- С.37-45.

8. Бернал X. Возникновение жизни. М.: Мир, 1969.-391с.

9. Боровский Е.В., Данилевский Н.Ф. Атлас заболеваний слизистой оболочки полости рта. -М.: Медицина, 1981. -285с.

10. Ю.Брагин В.Г. Клинико-лабораторная характеристика панкреатита у больных эпидемическим паротитом //Военно-мед. журнал.-1986.-№12. С.39-41.11 .Браун Г., Уолкен Дж. Жидкие кристаллы и биологические структуры.-М.:Мир, 1982.-198 с.

11. Гугутишвили Ц.Г., Симонишвили.Л.М. Дифференциальная диагностика критериев тезиграм слюны здоровых детей и детей с гиперплазией нёбных миндалин и хроническим тонзиллитом.//Педиатрия. 1990. -№12. -С. 78-79.

12. Гусев С.А. Количественное изучение эндотелиальной выстилки кровеносных капилляров околоушной слюнной железы в ходе 3-часового цикла //Биол. эксперим. биология. -1975. №7. - С.113-115 .

13. Гусев С.А. К вопросу о механизме управления нутритивным кровотоком в секретирующей слюнной железе //Молекулярная биология и молекулярная генетика патологических состояний в эксперименте и клинике. М., 1975. - С.128-130.

14. Денисов А.Б. Слюнные железы. Слюна. 5-е изд. перераб. и доп. М. Издательство РАМН. 2003. - 136 с.

15. Дубровина Л.А. Микрокристаллизация смешенной слюны удетей.//Стоматологическая помощь. Сб. тр. Рига. 1988. - С. 104-108.

16. Ивасенко П.И., Лобастов А.Ю., Поташов Д.А., Бажнов Е.Е., Семерьянов Ю.Г. Актуальные вопросы гнойной челюстно-лицевой хирургии //Сборник научных трудов (под ред. проф. Левенца А. А.). -Красноярск, 1988. С.71-75.

17. Иващенко Ю.Д., Юдин В.М., Гут И.Т. О возможном участии ростовых факторов слюнных желез в регуляции функцианальной активности иммунокомпетентных клеток эпителия кишечника у мышей //Механизмы иммуностимуляции. -Киев, 1985. С. 100-101.

18. Ильясов Я.З. Судебнохимическое обнаружение тубазида // Суд.- мед. экспертиза.- 1966.-N4.- С.43-45.

19. Кадыров Ш.К. Ферментативно-выделительная деятельность слюнных желез и возможность рекреторного происхождения ряда ферментов слюны: Автореф. дис. канд. мед. наук. -Краснодар, 1976. 21с.

20. Колесов B.C. Значение морфологического исследования в распознании неопухолевых заболеваний слюнных желез. //Врачебное дело, -1983. -№5. -С.96-98.

21. Колотилов H.H., Бакай Э.А. Жидкокристал-лическая"структура биологических объектов // Мол.биология. -1980.- Вып.27.- С.87-96.

22. Комарова Л.Г. Биохимические параметры крови и слюны при язвенной болезни у детей.//Вопр. охраны матер, и детства.-1988.- №7.- С. 13-16.

23. Разработка и внедрение фундаментальных исследований в ЦНИИЛ, на кафедрах мед. института и в практическое здравоохранение. -Свердловск. 1989. - С.80-81.

24. Лесников A.A. Диагностическое определение амилазы в слюне для выявления панкреатита у больных вирусным гепатитом //Вирусный гепатит, клиника, диагностика, лечение. -Л., 1975.-С.101-103.

25. Леус П.А. Комплексный перио дентальный индекс//Стоматология. -1988. №1. -С.28.

26. Леус П.А. Клинико-экспериментальное исследование патологии патогенетической консервативной терапии и профилактики кариеса зубов,.Дисс. .докт. мед.наук М. 1976.

27. Лобанов В.И. Микрокристаллоскопические реакции обнаружения некоторых производных барбитуровой кислоты // Журн. аналит. химии.-1966.- Вып.1.- С. 110-112.

28. Макеева И.М. Влияние экологических факторов на состояние органов и тканей полости рта у детей. Автореф. дисс. . канд мед. наук,- М., ММСИ. 1992.22с.

29. Максимовский Ю.М. Поражение твердых тканей зубов при гипер- и гипофункции щитовидной железы, профиолактика и лечение. Дисс. . док. мед. наук. М. - 1980. - 289 с.

30. Мальчикова Л.П., Ронь Г.И. Пути профилактики воспалительных заболеваний слюнных желез. //Профилактика стоматологи ческих заболеваний. М. - 1988.-С.136-137.

31. Махачева З.А.//Анатомо-функциональное обоснование хирургических вмешательств на стекловидном теле при витреальной деструкции. Дисс. докт. мед.наук. М.1994. 300с.

32. Мачавариани A.A. Функциональные состояния околоушных слюнных желез у больных язвенной болезнью желудка и 12-ти перстной кишки: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Тбилиси, 1985.-22с.

33. Мелева Н.С. Секреторная функция печени при нарушении деятельности слюнных желез //Физиология и патология гепатобилиарной системы. -Томск, 1980. С.46-47.

34. Минц Р.И., Скочинов С.А. и др. Формирование жидкокристаллических структур в тканевой жидкости в процессе заживления раны в условиях периодического облучения гелий-неоновым лазером.//Биофизика. - 1989. -Т.34. В.6. - С. 1060-1062.

35. Михайленко М.М. Возрастные особенности клинического течения и лечения неспецифических паротитов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Киев, 1986. 26с.

36. Михалева И.Н. Разработка унифицированной методики изучения и оценки фигур кристаллизации слюны. Дисс. . канд. мед. наук. М.2000. 120с.

37. Мороз Л.А., Теодор И.Л., Брик В.Б. и др. Кристаллографический метод исследования биологических субстратов.//Метод. рек. М. 1981. 16с.

38. Мороз Л.А.,Каликштейн Д.Б. Кристаллографический методтисследования биологических субстратов: Метод, рекомендации.- М., 1986.- 23 с.

39. Неретин В.Я., Кирьяков В.А. Кристаллографический метод исследования спинно-мозговой жидкости при заболеваниях центральной нервной системы// Сов. медицина.-1977.- №7.- С. 96-103.

40. Никольская М.Н., Гандель В. Г., Попков В. А. Обнаружение сульфаниламидных препаратов методом кристаллизации в тонком слое// Аптеч. дело.-1965.- №4.- С. 63-65.

41. Образцов Ю.Л. Экологические аспекты стоматологической патологии.

42. Стоматология.-1997.- №5.- С.75

43. Павлова Г.П. Стуктура слюнных желез собаки после резекции центрального отдела поджелудочной железы //Пищеварительные и эндокринные железы после резекции поджелудочной железы вэкперименте. Ставрополь, 1977. -С. 15-18.

44. Перминова И.С. Клинико-морфологическая характеристика слюнных желез при синдроме Шегрена: Дис. канд. мед. наук. -М., 1983. -131с.

45. Перминова И.С. Электронно-микроскопическая характеристика слюнных желез при синдроме Шегрена //Стоматология. -1982.-Т.61. -№1. -С.54-56.

46. Писчасова Г.К. Жидкокристаллическое состояние слюны основа к расшифровке механизмов её биологических свойств и физиологических функций. Омск. 1983.-8 с. (Рук. деп. в ВНИИМИ МЗ СССР, № - 6379-83).

47. Писчасова Г.К. Жидкокристаллическое состояние слюны основа к расшифровке механизмов её биологических свойств и физиологических функций. Омск. 1983.-8 с. (Деп. в ВНИМИ МЗСССР,№ - 6379-83).

48. Писчасова Г.К. Поверхностно-активные свойства слюны человека в условиях экспериментального кариеса и его лечения. //Матер, итоговой научной конф., посвященной 60- летию ин-та (стоматол. секция). МРЖ ВНИИМИ. XII.- № 12.- 1981. С.39-43.

49. Писчасова Г.К. Поверхностно-активные свойства слюны.//Омск. 1981 .Рук. депон. в ВНИИМИ. Д-4315-81.

50. Пожарицкая М.М., Максимовский Ю.М., Макарова О.В. и др. Возрастные изменения функции слюнных желез. //Стоматология.-1992.-ИЗ. -С.53-55.

51. Позднякова В.Т., Головкин В. А. Идентификация бензамона при помощи микрокристаллоскопии и кристаллооптики// Аптечн. дело.- 1965.- N5.-С.60-62.

52. Позднякова В.Т., Роговский Д.Ю., Головкин В.А. Идентификация гексо-ния при помощи кристаллооптики и микрокристаллоскопии // Фармацевтич. журн.- 1965.- МЗ.- С.33-36.

53. Постовит В.А. Детские капельные инфекции у взрослых.-Л., 1982.-208с.

54. Рединова T.J1. Микрокристаллизация слюны у детей послеприема углеводов и проведения профилактических противокариозных мероприятий. Стоматология, 1989. № 4. - С.62.

55. Россолау Т.О. К вопросу о взаимосвязи функций слюнных и поджелудочной желез //Механизмы регуляции деятельности и функциональная диагностика болезней поджелудочной железы. -Тарту, 1979. -С.86-91.

56. Рубинская В. Г. Новая качественная реакция на апрофен //Аптечн. дело,-1961.- N6,- С.54-56.

57. Рубинская В.Г., Фигуровский H.A. О качественном определении лекарственных веществ в смесях методом кристаллических налетов // Аптечн. дело.- 1962.- N6.- С.37-42.

58. Савина JI.B., Гольдфелью Н.Г. ,Кострова Ю.А. Морфотипы кристалло-грамм сыворотки крови при диабетической ретинопатии.//Офтальмол.ж.-1987.- №6.- С.353-356.

59. Саломатин Е.М. Реакция обнаружения фенотиазина, аминазина, дипразина, мепазина и имизина // Аптечн. дело.- 1965.- №4.- С.44-53.

60. Семерьянов Ю.Г. Состояние органов полости рта при заболеваниях слюнных желез. Дис. . канд. мед. наук. Омск, 1985.-214с.

61. Скопинов С. А., Яковлева С. В. Фотоиндуцированные структурные перестройки лиотропного жидкого кристалла в активной среде// Письма в журн. технической физики.- 1987.-Т. 13.-Вып. 2.- С. 68-71.

62. Советский энциклопедический словарь. М.: СЭ. 1990. - С.1115.

63. Степанов А. В. Судебная химия (химико-токсикологический анализ) и определение профессиональных ядов.- М.: Медгиз. 1951.

64. Теодор И.Л., Шатохина С.Н., Макаренко П.П. Характеристика кристаллографической картины базалиом// Пролиферативные заболевания кожи: Респ. сб. науч. тр./ Моск. обл. н.-и. кли-нич. ин-т.-М., 1985.- С. 40-42.

65. Тимофеев A.A. Кристаллографический метод исследованияслюны при заболеваниях челюстно-лицевой области.//М. 1986, 13с. Рук. деп. в ВНИИМИ, N 11368-86.

66. Токуева Л.И., Кузьмина Л.Н. Кристаллографическое исследование смешанной слюны у детей. Архангельск. 1990. 20 с. (Деп. в ВНИИМИ МЗСССР,№ . 19898-90).

67. Фигуровский H.A., Рубинскач В.Г. Качественное определение лекарственных веществ методом кристаллических налётов// Аптеч. дело.-1960.- №1.- С. 43-46.

68. Харченко C.B., Корнеева Г.А., Ветров A.A. Корнеева Г.А., Александров A.B., Романкевич Е.А.//Изв. АН СССР. Сер биол.- 1988. №3. - С.450-454.

69. Чандрасекар С. Жидкие кристаллы.-М.: Мир, 1980.-318

70. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Биокристаллические структуры и биоритмы// Актуальные проблемы экологической хронобиологии и хрономедицины: Тез. Докл. междунар. науч. конф.-Екатеринбург, 1994.-С. 205-210.

71. Шатохина С.Н.Диагностическое значение кристаллических структур биологических жидкостей в клинике внутренних болезней. Дисс. . .докт. мед наук. М. 1995.

72. Швайкова М.Д. Судебная химия.- М.: Медгиз, 1959.

73. Шелагуров A.A., Воробьев Л.Л. Диагностическое значение определения диастазы слюны при панкреатитах. //Сов. медицина.-1967.-№7. С.25-29.

74. Шилейкис П. Функциональное состояние слюнных желез у больных гастродуоденальной язвой //Тезисы хирургии язвенной болезни желудка и 12-ти перстной кишки. -Вильнюс, 1980.- С.365-367.

75. Шипский А.В. Афанасьев В.В., Дифференциальная диагностика заболеваний слюнных желез.// Пробл. нейростоматол. и стомат. 1997.-№2.- С.58-62.

76. Шпилевская Е.В. Микрокристаллизация слюны у детей с бронхолегочной патологий при кариесе зубов //Труды ЦНИИС.- М.-1991.- С.35-36).

77. Ярвиц А.А., Кононенко Е.В., Машкиллейсон А.А., Апатьева Е.А. Патогенетическое и прогностическое значение кристаллогенных свойств биологических жидкостей у больных красным плоским лишаем.// Вестн. дерматол.-1994.- № 6. С.7-10

78. Беркенгейм Н.А., Алибеков Я.И., Часовской В.А. Способ определения периода овуляции и устройства для его осуществления. Пат.РФ, RU(io> 2128943 (13) С. 1-2 29 мая 1989

79. Addadi L.,Weiner S. Interaction beetween acidic protein and cristalls:stereochemical requirements in biomineralization . // Proc. Natl.Acad.Sci.USA.-1985.-Vol.82.-P.4110- 4114.

80. Allen A., Pain R.H., Robsen T.R. et al., (1976) // Model for the structure of the gastric mucous gel. Nature №264: P. 88-89.

81. Andonopoulos A.P., Tzanakakis G.N.: Christophidou-mLight microscopy of dried saliva in the evaluation of xerostomia of the sicca syndrome. A preliminary report. J-Rheumatol. 1992 Sep; 19(9): 1390-2.

82. Andri G., Descos F., Andri F., Lambet K. Salivary Secretion in Subjects with Duodenal Ulcer-Digastion. -Basel.-1973. Vol.9. - N6. - P.526-231.

83. Arnaud J.P., Humbert W., Eloy R., Oilier J.C., Bruand P., AdloffM. et al. (1981) //Lithiase pancreatigue. Apport de la microscopie eletronigue a dalayage, da, la cristallogfaphie et de la spectrographie aur rayons X. Med Chir Dig №10: P. 613-616.

84. Atuma C, Engstrand L, Holm L.Helicobacter pylori extracts reduce gastric mucosal blood flow by a nitric oxide-independent but mast cell- and plateletactivating factor receptor-dependent pathway in rats.//Scand J Gastroenterol. 1999 Dec;34(12):l 183-9.

85. Baker N., Osseinis R.C. Ultrasone evaluation of salivary.glands. //Trans. Amer. Acad. Ophtal. otolaryng. -1977. -Vol.84.,N4(l). P.750-762.

86. Berardono-B; Melani-D; Ranaldi-F; Giachetti-E; Vanni-P.: Is the salivary "ferning" a reliable index of the fertile period? Acta-Eur-Fertil. 1993Mar-Apr; 24(2): 61-5

87. Biel-Casals, J. M.: Descripción de un nuevo test de ovulacion y analysis de sus resultados.// Med clin , 50, 1968. S.385-392

88. Blum J.L., Wroodoll S.W. Salivary secretion in Duodenal Ulcer Desease. //Gul. -1972. Vol.13. -N9. - P.713-717.

89. Buddecke E.Biochemische Grundlagen der Zahnmedizin. Berlin.- N.Y. 1981. Andreoli, C., Delia Porta, M.: Cyclic changes in female saliva.// J. Clin Endocr, 17.- 1957.- S 913-914

90. Cao Y, Blohm D, Ghadimi BM, Stosiek P, Xing PX, Karsten U.Mucins (MUC1 and MUC3) of gastrointestinal and breast epithelia reveal different and heterogeneous tumor-associated aberrations in glycosylation.//J Histochem Cytochem. 1997 Nov;45(l l):1547-57.

91. Castagliuolo I., Wershil B.K., Karalis K., Pasha A., Nikulasson S.T., Pothoulakis C. Colonic mucin release in response to immobilization stress is mast cell dependent.// Am J Physiol. 1998 Jun;274(6 Pt 1):G 1094-1100.

92. Casterman K.E., Colon M.J. Salivary Gland Pathology. //Med. pract. J. -1984. Vol.23.-Nil. -P. 1321-1325.

93. Challacomble S.L. Immunoglobulins in Parotid Soliva and Serum in Relation to Dental Caries in Man. //Caries Res. 1976. -Vol.10. - N3. - P. 165177.

94. Chu J.S., Chang K.J. Mucin expression in mucinous carcinoma and other invasive carcinomas of the breast.// Cancer Lett. 1999 Jul 19; 142(1): 121-7.

95. Crowther R.S., Marriott C.(1984) //Counter-ion binding to mucusglycoproteins. J Pharm Pharmacol №36: P. 21-26.

96. Dabid A., Drailing M.D., Noronha M., Pieroni P., Wolfson P. The Parotid and the Pancreas. //Amer. J. Gastroenter. -1985. Vol.70. - N6. - P.627-634.

97. Daems W.F. et al. // Chem. Courant.- 1964. Vol.63.- P. 15-17.

98. Dent T.L. Pancreatic Diagnosis and Therapy. -New York, London, Toronto, Sydney, San Francisco. 1981. - 553p.

99. Donath K. Contribution to the etiology and pathogenesis of chronic recurring parotitis. //Dtsch. Zahnaerztl. Lt. 1979. - Bd.34. - N1. - S.45-49.

100. Epivatiamos A., Harrison J.D., Garrett J.R., Davies K.J., Senkus R. (1986) // Ultrastructural and histochemical observations on intracellular and luminal microcalculi in the feline sublingual salivary gland. J Oral Pathol №15. P.513-517.

101. Glimcher M.J. (1981) // On the form and function of bone; from molecules to organs. Wolffs law revisited. In: Veis A (ed) The chemistry and biology of mineralized connective tissues. Elsevier, New York, P. 617-673.

102. Guida M., Barbato M., Bruno P., Lauro G., Lampariello C. Salivary ferning and the menstrual cycle in women. //Clin-Exp-Obstet-Gynecol. 1993; 20(1): 48-54

103. Hersberg St. M., White C., Wolf K.O. Characterization of salivary proteins in patients with Sjogrens syndrome.//Oral. Surg. 1973. - Vol.36. - N6. -P.814-817.

104. Humbert W., KirschR., Simonneaux V. (1986)//Is mucus involved in biocrystallization? Study of the intestinal mucus of the sea water eel Anguilla anguilla L. Cell Tissue Res №245: P. 599-604.

105. Jmai Y. Physiology of salivary secretion. /Front. oral,physiol. -1 976. -Vol.2. P. 184-206.

106. Johanssen J.V., Sobrinko-Simoes M.(1980) //The origin and significance of thyroid psammoma bodies. Lab Invest №43:P. 287-296.

107. Kakisaki G., Suito T., Soeno T. etal. Parotid saliva tests in patients withpancreatic diseases befor and after surgery. //Tohoku J.Exp. Med. -1977. Vol.121. - N3. - P.247-252.

108. Kakisaki G., Suito T., Soeno T., Sasahara M. Further studies of parotid saliva test as a diagnostic means for pancreatic disorders. Diagnostic means for pancreatic disorders. /Tohoku J Exp. Med. 1971. - Vol.113. ,T1. - P.53-63.

109. Kakisaki G., Tahoyaoki S., Takchokos etal. Parotid saliva compared with pancreozymin secretion test in diagnosis of pancreatic disorders. //Tohotu J. exp. Med. 1974. - Vol.113. - P.54-64.

110. Konno A., Ito E. Studies on clinical and etiological aspects of recurrent swelling of the paratid gland. //Otologia Kukuoka. 1978. - Vol.24., Suppl. 3. -P.838-909.

111. KreplerP. Chronische rezidivierende Parotitis.//Padiat. Prax.-1976.-Bd.17. N4. - S.693-710.

112. Lechene de la Porte P, Abouakil N, Lafont H, Lombardo D. Subcellular localization of cholesterol ester hydrolase in the human ifttestine.// Biochim Biophys Acta. 1987 Aug 15;920(3):237-46.

113. Lowenstam H. A. (1981) // Minerals formed by organisms. Science 211: P. 1126-1131.

114. Maki T., Matsushiro T., Suzuki N., Nakamura N. (1971) //Role of sulfate glycoproteins in gallstone formation. Surg Gyn Obstet №132: P. 846- 854.

115. Mandel J.D., Wotman S. The salivary secretion in health and didease. //Oral Science Reviews. -1976. N8. - P.25-47.

116. Marcinkiewicz M., Peura D.A., Sarosiek J. Modulatory impact of acid and pepsin on esophageal hydrophobicity in humans.//Am J Gastroenterol 1995. -Nov;90(l 1):2020- 2024

117. McAnally M. Parotutus. Clinical presentation and management. //Postgrad. Med. 1982. - Vol.71. - P.87-99.

118. McCoil K.E.L.,Brodie M.J., Whitesmith R. etal. Parotid Saliary Gland Function in Patients with Exocrine Pancreatic Insufficiency. //Acta Hepataga stroenter. 1979. Vol.26. - P.409-412.

119. Nachiero M., Adler M., Pieroni P.L. Parotid and the Pancreas Correlation of Parotid Gland and Pancreatic Secretion after Radiation-induces Chzonic Pancreatitis. //Amer. J. Gastoenterol. -1978. Vol.70. - N2. - P. 151-154.

120. Nagaraj R.H. Differential estimation of amylase isoenzymes using a specific pancreatic amylase inhibitor. //Indian J. Med. Res. -1 986. Vol.84. -P.89-94.

121. Navazesh M., Christensen C.M. A comparision of whole Mouth Resting and Stimulated Salivary Measurement Procedures. //J. Dent. Res. -1982. -Vol.61.-N10.-P.l 158-1162.

122. Noroncha M., Dreiling D.QA., Bordario O. The Parotid and the Pancreas. Parotid secretion after Secretion Stimulation as a Screening. Test of Pancreatic Dysfunction. //Amer. .Gastroenterology. -1 988. Vol.70. - N3. -P.283-285.

123. Nunes D.P., Afdhal N.H., Offner G.D. A recombinant.bovine gallbladder mucin polypeptide binds biliary lipids and accelerates cholesterol crystal appearance time.// Gastroenterology. 1999 Apr; 116(4):936-42

124. Ohara S., Byrd J.C., Gum .JR. Jr., Kim Y.S. Biosynthesis of two distinct types of mucin in HM3 human colon cancer cells.//Biochem J. 1994 Feb 1;297 (Pt 3):509-16.

125. Perec G.J., Celener D., Tiscornia O.M. et al. Effects of Chronic Ethanol Administration of the Automic Innervation of Salivary Glands, Pancreas and Heart. //Amer. J. Gastroenterol.-1979.-Vol.72.-Nl.-P.46-59.

126. Raskin R.J., Tesar J.T., Lawless O.J. Hypocalemic periodic paralysis in Sjogren"s syndrome. //Rech. Intern., Med. 1981.-Vol. 141. - N12. - P. 16711673.

127. Rohr A., Sokolowski A. Electrophoresis studies of mixed saliva concentrates. //Padiatr. Grenzgeb. 1985. - Bd.24. - N3. - S.193-198.

128. Rolando M., Baldi F.Calabria G.A. Tear mucus ferming test In keratoconjunctivitis sicca // The Preocular Tear Film In Health. Disease, and Contact Lens Wear / Ed. by F. J. Holly.- Lubbock etc.: Dry Eye Institue, 1986. P.203-210.

129. Rotta L., Matechova E., Cerny M., Pelak Z. //Cesk Gynekol. 1992.-Vol.57.-P.340-352.

130. Sharon A., Ben-Arych H., Stzhak B., et al. Salivary composition in diabetic patients. //J. Oral Med. -1985. Vol.40. -N 1. - P.23-26.

131. Shimono M., Ashida K., et al. Secretion and membrane fusion in the Salivery Gland//The Bulleten of Tokyo Dental College. -1984. -Vol.25. N4. -P.177-196.

132. Skurk A., Krebs S., Rehberg J. Flow rate, Protein, amylase, Lysozyme and Kalleikrein of human parotid saliva in health and disease. //Arch, oral biol. -1979. Vol.24. - N10-11. - P.739-741.

133. Steinbach E., Srobm M. Zur Pathogenese der chronisch-rezi-diviezenden, sialetatischen Parotitis. //Z. Laryngol Rhinol. -1982. Bd.61. - N2. - S.66-69.

134. Tabbara K.F.,Okumoto M. Ocular fernlng test. A qualitative test for mucus deficiency // Ophthalmology.- 1982.- Vol.89.- P. 712-714.

135. Van Klinken B.J., Einerhand A.W., Buller H.A., Dekker J. The oligomerization of a family of four genetically clustered human gastrointestinal mucins.//Glycobiology. 1998 Jan;8(l):67-75.

136. Weiner S., Traud W. (1984) // Macromolecules in molluse shells and their functions in biomineralization. Philos Trans R Soc Lond Biol. №304. P. 409-558.Amer. Zool. 24, 945-951.

137. Wiliams R. J. P. (1984) // An introduction to biominerals and the role of organic molecules in their formation. Philos Trans R Soe Lond Biol. №304. P. 411-424.

138. Womack N.A. (1971) // The development of gallstones. Surf Gyn Obst №113: P. 937-945.

139. Zajacz M., Suveges I. Shape and structure of pseudocrystals In the human vitreous // Acta lvlorphologlca Acad. Scl.Hung. 1970. - Vol.18. - P.l 11-115.

140. Zondek, B.: Arborization of cervical and nasal mucus and saliva.// Obstet Gynec, 13, 1959,-S 477-481

141. Zondek, B.: Functional significance of the cervical mucus.// Int. J. Fertil, 1, 1956. S.225