Этапы активации в и т лимфоцитов таблица. Активация В-лимфоцитов. Влияние антигенов на В-лимфоциты. Для чего нужны лимфоциты в организме

Под активацией клеток понимают их переход из состояния покоя в функционально активное состояние - макрофаги продуцируют активные формы кислорода, тучные клетки выбрасывают гранулы, мышечные клетки сокращаются и т.д. В случае лимфоцита активация также означает выход из состояния покоя (G0), но в несколько ином смысле: покоящийся лимфоцит находится вне клеточного цикла, а его активация означает вступление в цикл. Это последствие активации лимфоцитов глубоко функционально, поскольку любому проявлению функции лимфоцитов должно предшествовать их размножение (поскольку исходная численности клеток в каждом клоне мала). Это не относится к естественным киллерам - лимфоцитам, популяция которых не имеет клональной структуры. Активация NK-клеток не связана с пролиферацией и означает переход в состояние готовности выполнять цитотоксическую функцию.
Молекулярные основы активации Т-клеток
Активация клеток, в том числе лимфоцитов, всегда сопряжена с экспрессией многих генов. В случае лимфоцитов активация должна приводить прежде всего к экспрессии генов, обеспечивающих пролиферативную экспансию клона. Суть подготовки Т-клеток к пролиферации состоит прежде всего в экспрессии генов аутокринного ростового фактора - IL-2 и его рецептора, а точнее a-цепи этого рецептора, обеспечивающей достижение необходимого уровня сродства к цитокину, что служит условием выполнения рецептором его функций. Оба эти гена являются индуцибельными, т.е. в покоящемся состоянии они выключены, но экспрессируются в ответ на индуцирующее воздействие. Сигнал к включению гена поступает из его регуляторного (промоторного) участка, в котором расположены сайты специфического взаимодействия с определенными белками - транскрипционными факторами. Некоторые их таких белков исходно представлены в клетке в активной форме, но большинство отсутствует и может быть синтезировано de novo или активировано путем фосфорилирования или удаления ингибирующей субъединицы. Таким образом, молекулярная основа активации - образование необходимых транскрипционных факторов, обеспечивающих включение индуцибельных генов.
На Т-лимфоциты активирующее воздействие оказывают индукторы активации. В физиологических условиях таким индуктором служит антигенный стимул. Само по себе распознавание антигена при контакте Т-хел- пера с АПК не может повлиять на активность гена в силу пространственной разобщенности мембранного рецептора и генов, локализующихся в ядре. TCR проникает внутрь клетки после связывания с антигеном, но не для того, чтобы мигрировать в ядро и повлиять на активность гена, а для того, чтобы быть расщепленным. Однако при связывании антигенного комплекса с TCR в сочетании с костимулирующим воздействием возникает сигнал, достигающий ядра и регулирующий экспрессию генов. Передача сигнала осуществляется по каскадному принципу. На разных этапах передачи сигнала ее осуществляют молекулы ферментов (главным образом, протеинкиназы, активирующие белки на каждой очередной стадии передачи сигнала), а также адапторные и ГТФ-связывающие белки. Сигнал исходно является двойственным, поскольку его передача осуществляется одновременно от TCR и CD28. Затем эти пути пересекаются и вновь разделяются на несколько ветвей. Конечный результат передачи сигнала по каждому сигнальному пути - формирование транскрипционного фактора. На рис. 3.90 представлена типовая схема внутриклеточной передачи сигнала, завершающейся формированием транскрипционных факторов и активацией генов. Для активации Т-клеток требуется формирование трех транскрипционных факторов - NF-AT, NF-kB и AP-1. Далее рассмотрим осуществление внутриклеточной передачи сигнала на примере активации Т-хелперов при распознавании презентируемого дендритными клетками антигена.
Связывание комплекса MHC-II-пептид вызывает конформационные изменения молекулы TCR и связанной с ней молекулы корец ептора CD4. Пока окончательно не известно, происходит ли при этом только изменение конформации рецепторов или они олигомеризуются. Такие изменения активируют тирозинкиназы, ассоциированные с рецептором и корецеп- тором - Lck (p56lck), связанную с CD4, и Fyn (p59fyn), связанную с CD3. Указанные тирозинкиназы называют рецепторными, или проксимальными, в связи с тем, что они непосредственно примыкают к рецептору, входя в рецепторный комплекс. Обе упомянутые киназы относят к семейству Src-киназ. Киназы этого семейства содержат домены SH1, SH2 и SH3 (SH - от Src-homology) (рис. 3.91). Первый домен обладает ферментативной активностью, остальные взаимодействуют с другими киназами и адапторными белками. Функция тирозинкиназ состоит в фосфорилировании по остатку тирозина белков-мишеней, что необходимо для их активации и проявления функций, в том числе ферментативных. Мишени рецепторных киназ многочисленны. К ним относят сами молекулы Fyn и Lck (что обусловливает их аутофосфорилирование), а также полипептидные цепи TCR и другие киназы. Особенно многообразны мишени киназы Lck.
Однако первоначальным условием активации рецепторных киназ является, наоборот, их дефосфорилирование, обеспечивающее пере-

ход из гиперфосфорилированного в нормальное состояние. Дело в том, что в покоящейся клетке SH2-домен киназы Lck находится в свернутой форме вследствие фосфорилирования С-концевого остатка тирозина Y505 конститутивно активированной киназой Csk. Фосфорилированный Y505 взаимодействует с помощью фосфатной группы с остатком тирозина в Sffi-домене, к которому и подтягивается С-конец молекулы. В таком виде фермент не активен, поскольку при этом не может быть фосфори- лирован функционально важный остаток Y394 в домене SH1. Для снятия такой функциональной блокады необходимо дефосфорилирование с последующим развертыванием молекулы, что осуществляется с участием тирозинфосфатаз. Основную роль в переводе рецепторных киназ в «рабочее» состояние выполняет молекула CD45, цитоплазматический домен которой обладает активностью тирозинфосфатазы. Ранее уже упоминалось, что эта крупная молекула, препятствующая формированию тесного контакта между дендритной клеткой и Т-хелпером, вначале удаляется из зоны иммунного синапса, а затем часть молекул возвращается в эту зону для выполнения своей функции - дефосфорилирования молекул рецепторных тирозинкиназ. После того как остаток Y394 становится доступным для фосфорилирования, Lck может проявлять активность тирозинкиназы.
В генерации сигналов, передаваемых от полипептидных цепей комплекса TCR-CD3, наиболее важно наличие в цитоплазматическом участке у-, 5-, е- и Z-цепей активационной последовательности ITAM, о которой уже неоднократно упоминалось. Структура этого мотива такова: YXXI/L/ VX(6-8)YXXI/L/V (где Y - тирозин, Х - любой остаток, I/L/V - изолейцин, лейцин или валин) (рис. 3.92). Фосфорилирование остатков тирозина

Рис. 3.92. Сопоставление характеристик активационных и ингибирующих мотивов (ITAM и ITIM)

в ITAM делает этот участок доступным для распознавания аналогичными участками сигнальных молекул, расположенных более дистально. Среди полипептидных цепей TCR наиболее важна для передачи сигнала Z-цепь. В отличие от у-, 5- и е-цепей TCR, имеющих по одному участку ITAM, в цитоплазматической части Z-цепи расположены 3 последовательности ITAM, предназначенные для взаимодействия с остатками тирозина тирозинкиназы ZAP-70 (от Z-associated protein - ^-ассоциированный белок; масса 70 кДа) - ключевого фактора в передаче сигнала от TCR при его связывании с лигандом. Фосфорилирование Z-цепи является наиболее ответственным и в то же время наиболее уязвимым этапом активации Т-клеток. Полагают, что именно для обеспечения фосфорилирования всех мотивов ITAM этой молекулы необходимо длительное поддержание контакта Т-лимфоцитов и дендритных клеток. В Z-цепи покоящейся Т-клетки фосфорилирован 1 остаток тирозина; отсутствие фосфорилирования приводит к развитию апоптоза (рис. 3.93). После взаимодействия Z-цепи и ZAP-киназы запус-

Рис. 3.94. Схема сигнальных путей при активации Т-клеток. Распознавание комплекса молекулы МНС с антигенным эпитопом в сочетании с костимуляцией индуцирует запуск сигналов, передаваемых в ядро с помощью 5 каскадов, обеспечивающих формирование 3 транскрипционных факторов, необходимых для активации клетки. Жирным контуром обведены факторы, для которых показана высокая степень зависимости от костимуляции

кается полномасштабный процесс в виде нескольких параллельных путей передачи активационного сигнала (рис. 3.94).
Молекулу ZAP-70 относят к тирозинкиназам семейства Syk. Она содержит тандем из двух SH2-доменов. Условие ее взаимодействия с фцепью - предварительное фосфорилирование остатков тирозина в ITAM фцепи. После фосфорилирования 2-й остаток тирозина в мотивах ITAM фцепи взаимодействует с тирозином S^-доменов киназы ZAP-70. В результате фосфатная группа тирозина фцепи становится общей с тирозином Sffi-домена молекулы ZAP-70. За этим следует фосфорилирование остатков тирозина в ферментативном домене молекулы ZAP-70, осуществляемое тирозинкиназами Lck и, возможно, Fyn, что приводит к включению ферментативной (киназной) активности молекулы.
Дальнейшая передача сигнала обусловлена взаимодействием ZAP-70 с ее главным субстратом - адапторным белком LAT (от Linker for activation of T-cells - линкер активации Т-клеток). Этот белок связан с мембраной и входит в состав рафтов. После катализируемого ZAP-70 фосфорилирования LAT приобретает способность связывать сигнальные молекулы, участвующие в дальнейшей передаче сигнала: адапторные белки SLP-76, Grb2, фактор Vav, а также ферменты - PLCy1 и PI3K. Активация некоторых из упомянутых белков зависит от LAT не напрямую, а косвенно. Так, через SH3-домены

адапторных белков семейства Grb2 к сигнальному пути подсоединяются факторы SLP-76 и Sos. SLP-76, в свою очередь, опосредует подключение к сигнальному пути PLСy1 и ГТФазы Ras. Активация PLCy1 происходит с участием тирозинкиназы Itk, относящейся к семейству Btk - третьему (после Src и Syk) семейству тирозинкиназ, участвующих во внутриклеточной передаче сигнала при активации лимфоцитов. Все сигнальные факторы, вовлекаемые в процесс активации с прямым и косвенным участием LAT, рекрутируются в состав клеточной мембраны и взаимодействуют с ее фосфоинозитидными компонентами. Комплекс, образуемый при взаимодействии SLP-76, Vav и Nck, реагирует с белками цитоскелета PAK и WASP, служащими медиаторами перестроек в цитоскелете активируемых клеток.
Активированная PLCy1 катализирует расщепление фосфатидилино- зитол 4,5-бифосфата с образованием диацилглицерола (DAG), который остается связанным с мембраной, и инозитол-1,4,5-трифосфата (рис. 3.95). Инозитол трифосфат поступает в цитоплазму и взаимодействует с рецепторами на поверхности эндоплазматического ретикулума, что обусловливает выход ионов Са2+ из внутриклеточных хранилищ. Опустошение последних вызывает открытие Са2+-зависимых каналов в клеточной мембране, через которые в клетку поступают ионы Са2+ из внеклеточного пространства. В результате возрастает концентрация свободных ионов Са2+ в цитоплазме клетки. Ионы Са2+ активируют фосфатазу кальциневрин, дефосфорилиру- ющую цитоплазматический компонент транскрипционного фактора NF-AT (Nuclear factor of activated T-cells - ядерный фактор активированных Т клеток) (рис. 3.96). Это обусловливает перемещение фактора в ядро, взаимодействие с ядерным компонентом и формирование зрелой формы молекулы NF-AT, способной взаимодействовать с ДНК в промоторных участках генов, вовлеченных в активацию Т-клеток (IL2, IL2R и др.).
Диацилглицерол традиционно рассматривали как фактор, активирующий протеинкиназу С (PKC) - уже не раз упоминавшуюся ранее серин/тре-

Рис. 3.96. Са2+-зависимое звено активации Т-клеток и его блокада циклоспорином А. Зависимый от инозитолтрифосфата сигнальный путь приводит к мобилизации в ядро транскрипицонного фактора NF-AT. Этот путь может быть блокирован циклоспорином А, способным в комплексе с циклофиллином инактивировать фосфатазу кальциневрин, ответственную за дефосфорилирование цитоплазматического фактора NF-AT (что служит условием его миграции в ядро)

ониновую киназу, признаваемую одним из ключевых факторов активации Т-клеток. Однако оказалось, что изоформы РКС, активируемые диацил- глицеролом, не имеют отношения к активации Т-клеток. В ней участвует изоформа 0 РКС, появляющаяся в иммунном синапсе на пике его «зрелости». Ее рекрутирование в иммунный синапс зависит от активности Р13К и Vav (последний фактор связан с цитоскелетом, роль которого в транспорте РКС0 очень важна). Поскольку активация Vav зависит от сигнализации не только через TCR, но и через CD28, а CD28-зависимый путь реализуется с участием PI3K (она ассоциирована с CD28 - см. далее), становится очевидным, что PI3K и Vav представляют различные этапы одного сигнального пути и, таким образом, вовлечение в активацию молекулы РКС0 зависит от костимуляции через CD28. При этом не вызывает сомнений роль в активации РКС0 сигналов, поступающих от TCR, поскольку РКС0 фосфорили- руется (и, следовательно, активируется) киназой Lck. Допускают участие в активации РКС0 и других факторов, в том числе диацилглицерола, но эти влияния второстепенны. Активация PKC0 необходима для предотвращения апоптоза активируемых клеток и включения двух из трех критических транскрипционных факторов, необходимых для экспрессии генов IL2 и IL2R - АР-1 и NF-kB. РКС0-зависимая активация АР-1 реализуется через Rac/JNK-ветвь MAP-каскада (о нем будет сказано далее). Путь, приводящий к активации транскрипционного фактора NF-kB, содержит в качестве

промежуточных звеньев последовательно активируемые (с участием PKC0) факторы CARMA-1, Bcl-10 и MALT-1, IKK. IKK фосфорилирует ингибирующую субъединицу NF-kB - IkK, придавая ей способность к связыванию убиквитина, что предопределяет ее последующую деградацию. При этом освобождается активная субъединица NF-kB, мигрирующая в ядро и выступающая в роли транскрипционного фактора - одного из трех, необходимых для экспрессии генов активации Т-клеток. Транскрипционный фактор NF-kB, играющий ключевую роль при активации клеток врожденного иммунитета, был рассмотрен выше (см. раздел 2.2.4).
Столь же широко при активации клеток используется еще один сигнальный путь, запускаемый при активации Т-лимфоцитов - MAP-каскад, или MAP-модуль (от Mitogen-activated kinases - киназы, активированные мито- геном). Его роль состоит главным образом в индукции транскрипционного фактора АР-1 (димера c-jun/c-fos). Существует 3 ветви этого каскада, приводящие к образованию трех типов MAP-киназ (MAP^ - ERK1/ERK2 (от Extracellular signal-regulated kinases - киназы, регулируемые внеклеточными сигналами), p38 и JNK (от c-Jun NH2-terminal kinases - c-Jun NH2-концевые киназы). Каскады, приводящие к активации MAP-киназ, включаются с участием адапторных белков и низкомолекулярных ГТФаз. Один из адап- торных белков - Grb2 (Growth factor receptor bound protein 2), активируется при взаимодействии с фактором LAT. Активированный Grb2 спонтанно связывается с другим LAT-активированным белком SLP-76 и фактором Sos (от Son of sevenless). Sos представляет фактор замещения гуаниннуклеотидов: он обусловливает замещение ГДФ на ГТФ в составе малых G-белков (т.е. белков, связывающих гуаниннуклеотиды). Поэтому комплекс SLP-76/Grb2/Sos обусловливает активацию G-белка Ras, превращая связанный с ним ГДФ в ГТФ. Ras-ГТФ активирует серин/треониновую киназу Raf (киназу киназы MAP-киназы - МККК). Далее следует каскад реакций: Raf активирует МЕК (киназу MAP-киназы - МКК), а МЕК активирует вышеупомянутые MAP-киназы ERK1 и ERO. Активацию JNK-ветви MAP-каскада инициирует упоминавшийся выше фактор Vav (зависимый от LAT и связанный с активацией цитоскелета, а также РКС0, см. выше). Он вызывает переход ГДФ в ГТФ в комплексе с G-белком Rac (семейство Rho). Rac-ГТФ активирует киназу МЕКК (выступающую в роли МККК), она активирует киназу JNKK (MKK), которая, в свою очередь, активирует MAP-киназу JNK. Третий путь MAP-модуля, приводящий к образованию MAP-киназы р38, также зависит от G-белков семейства Rho. Он аналогичен по общей схеме двум другим путям, но изучен менее детально.
Активация MAP-киназ ERK1/ERK2, JNK и p38 осуществляется путем фосфорилирования остатков треонина и тирозина в мотиве TXY, причем роль Х в трех типах киназ выполняют различные остатки (соответственно Glu, Pro и Gly). Названные MAP-киназы обусловливают формирование транскрипционных факторов, участвующих во многих клеточных процессах. ERK1/ERK2 обусловливает образование транскрипционных факторов АР-1 и Elk-1, JNK - факторов ATF2, Elk-1 и c-Jun (компонент АР-1), p38 - факторов ATF2, Elk-1 и MEF-2C.
Запуск рассмотренных выше сигнальных путей при активации Т-клеток происходит при параллельном связывании TCR и костимуляции через молекулу CD28. Дифференцирование сигнальных путей, включаемых через эти мембранные молекулы, а также расшифровка взаимодействия этих путей до конца не завершены. Однако общая картина проявляется достаточно четко, чтобы в общих чертах понять молекулярные основы костимуляции. При связывании TCR, координированном со связыванием корецептора, происходит изменение конформации комплекса TCR-CD3, CD4 вызывает активацию рецепторных тирозинкиназ Fyn и Lck, а также фосфатазы CD45. Конечный результат «проксимальных» событий - фосфорилирование Z-цепи рецепторного комплекса и передача активационного сигнала на киназу ZAP-70. Далее с участием адапторных белков LAT, SLP-76 и Vav область, вовлеченная в передачу сигнала, существенно расширяется, включая мембранно-связанные киназы, цитоскелет и малые G-белки. Сигнальный путь, приводящий (через активацию PLCyl, образование инозитолтрифосфата и активацию кальциневрина) к мобилизации Са2+ и активации транскрипционного фактора NF-AT, по-видимому, реализуется без прямого участия сигналов, генерируемых при костимуляции. Другие пути в большей или меньшей степени зависят от костимулирующего сигнала.
Наиболее прямое следствие костимуляции через CD28 - активация мембранного фермента PI3K, физически связанного с молекулой CD28. Этот фермент катализирует образование фосфатидилинозитол 4, 5-бифосфата, служащего источником инозитолтрифосфата. Однако это событие напрямую не связано с активацией и может рассматриваться как подготовительное. При активации клетки фосфатидилинозитолтрифосфат активирует Vav - узловой фактор, ответственный за вовлечение в процесс активации цитоскелета и участвующий в рекрутировании и активации протеинкиназы PKC0. Этот фермент важен для функционирования сигнального пути, приводящего к формированию транскрипционных факторов NF-kB и АР-1. В обоих случаях роль PKC0 в наибольшей степени проявляется во включении Rас/JNK-ветви MAP-каскада. Raf/ERK- и Rac/p38-ветви MAP-каскада в меньшей степени зависят от PKC0, а следовательно, от костимуляции. Таким образом, молекулярная основа костимуляции - вовлечение в процесс активации Т-хелпера сигнальных путей, реализуемых с участием трех ключевых факторов - PI3K, фактора Vav и изоформы 0 протеинкиназы С. Из трех ключевых транскрипционных факторов, запускающих гены активации Т-клеток, экспрессия двух (АР-1 и NF-kB) зависит от костимуляции и только для выработки NF-AT непосредственно костимуляция не требуется.
Таким образом, в результате в Т-клетке формируется 3 транскрипционных фактора - NF-AT, NF-kB AP-1. Формирование этих факторов происходит различными путями. Активный NF-AT образуется в результате сборки димера, включающего цитоплазматический и ядерный субкомпоненты NF-AT - NF-ATc и NF-ATn. Если NF-ATn - конститутивный фактор, всегда присутствующий в ядре Т-клетки, NF-ATc должен быть активирован для миграции в ядро, что достигается его дефосфорилированием, катализируемым кальциневрином (см. выше). Транскрипционный фактор NF-kB активируется путем отщепления от комплекса IkB-NF-kB ингибирующей субъединицы IkB. Как уже говорилось выше, это происходит при фосфорилировании IkB киназой IKK, активируемой с участием РКС0. Фосфорилированная субъединица становится доступной для деградации

по убиквитиновому пути. Фактор АР-1 - димер белковых продуктов двух индуцибельных протоонкогенов - c-fos и c-jun. Для экспрессии этих генов и синтеза белков необходимы соответствующие транскрипционные факторы, а именно Elk-1 (для c-fos) и JNK (для c-jun). Как уже было указано выше, Elk-1 и JNK - конечные продукты деятельности различных ветвей MAP-каскада. Синтезируемые de novo белки c-fos и c-jun образуют гомо- и гетеродимеры, формирующие транскрипционный фактор АР-1.
Рассмотренные три фактора (NF-AT, NF-kB и AP-1) нужны для индукции генов активации Т-клеток - в первую очередь IL2 и IL2R. Промоторный участок гена IL2 содержит 9 сайтов связывания транскрипционных факторов (рис. 3.97). Среди них есть 2 участка связывания октомера Oct, не лимитирующего процесс индукции гена. Из трех ключевых транскрипционных факторов NF-kB взаимодействует с промотором в одном сайте, не зависимом от других транскрипционных факторов. Два других фактора - NF-AT и AP-1 - взаимодействуют с промотором как отдельно друг от друга (по 1 сайту связывания), так и в комплексе (3 сайта связывания). Заполнение всех сайтов соответствующими транскрипционными факторами, приводящее к индукции гена, служит конечным результатом передачи сигнала при активации Т-клеток.
Выше были подробно рассмотрены сигнальные пути, участвующие в активации Т-хелперов. Активация цитотоксических Т-клеток осуществляется по сходным механизмам.
3.5.2.2. Проявления активации Т-клеток
Активация CD4+ Т-клеток (как и любых Т-лимфоцитов) приводит к экспрессии большого числа генов, среди которых наибольшую роль в реализации основных эффекторных событий играют гены IL2 и IL2R, кодирующие соответственно цитокин IL-2 и a-цепь его рецептора. Экспрессия гена IL2 происходит примерно через 1 ч после получения стимулирующего сигнала. Секрецию белка IL-2 стимулированными Т-клетками in vitro выявляют через 3-4 ч; она достигает пика через 8-12 ч и прекращается через 24 ч. In vivo секреция IL-2 начинается через 1-3 сут после введения антигена

Рис. 3.98. Временная динамика экспрессии молекул активации Т-клеток. На графи
ке представлены сроки экспрессии ключевых молекул активации после стимуляции Т-клеток

(иммунизации) и сохраняется в течение 7-12 сут. Экспрессия a-цепи рецептора IL-2 происходит несколько позже и продолжается дольше - in vitro ее выявляют через 4 ч после стимуляции; максимума она достигает через 2-3 сут и прекращается через 5 сут (рис. 3.98).
Одновременно с геном IL2 в кратчайшие сроки после действия стимулятора (в физиологических условиях - антигенного комплекса пептид-MHC) экспрессируются гены с-Myc и N-Myc, называемые ранними активационными генами. Они участвуют в подготовке клеток к митозу. Через 2-3 ч на поверхности Т-клетки появляется CD69 - самый ранний активационный антиген, частично мобилизуемый из внутриклеточных депо, а частично экспрессируемый de novo. Его экспрессия продолжается немногим более суток. Вскоре после CD69 на поверхности клетки появляется другой ранний маркер активации - CD25, представляющий уже упомянутую a-цепь рецептора для IL-2. Несколько раньше выявляют экспрессию ряда цитоки- новых генов и синтез ограниченных количеств соответствующих цитокинов (IFNy, IL-4, IL-5, IL-6).
Следующие проявления активации наблюдают через сутки после действия стимулятора, когда экспрессируется молекула рецептора для транс- феррина (CD71). Этот фактор играет важную роль в пролиферации, поскольку для ее осуществления необходимы ионы железа. В последующие дни (3-6 сут) экспрессируются молекулы MHC-II, относимые к поздним маркерам активации Т-клеток, а затем - р1-интегрины, обозначаемые как очень поздние активационные антигены - VLA (Very late activation antigens), и секретируются хемокины. Эти поздние проявления активации клеток совмещаются с пролиферативным процессом.

Если вас интересует, в каких случаях назначается анализ крови на активированные лимфоциты, то ознакомьтесь со статьей.

В ней рассказывается про особенности данных клеток крови. Лимфоциты являются разновидностью белых кровяных телец, называемых лейкоцитами.

Они производятся органами, отвечающими за поддержание иммунной системы человека.

Попадая в организм здорового человека, вирус или какой-либо инфекционный агент сразу же подвергается массированному воздействию лимфоцитов, выработанных либо в зоне тимуса (у детей), либо в зоне костного мозга (у взрослых).

Взаимодействуя с потенциально опасными инородными антигенами, лимфоциты пытаются выработать адекватный механизм эффективного ответа на патогенную деятельность, тем самым защитив организм человека от проблемы.

Лимфоциты здорового человека бывают трех видов и делятся на клетки, маркируемые врачами-иммуннологами латинскими буквами B, T и NK.

Лимфоциты данных групп обладают сходным защитным действием, однако они используются организмом для решения различных, зачастую достаточно специфических проблем.

Лимфоциты группы B работают против инородных структур, проникших в тело человека. В периферической крови больного человека, циркулирующей по сосудам, в свободном виде содержится от восьми и до двадцати процентов данных клеток.

Лимфоциты T-группы относят к классу цитотоксических клеток. Они считаются наиболее распространенными, в среднем их количественное содержание в периферической крови может доходить до семидесяти процентов.

Последняя группа лимфоцитов, маркируемая NK, является самой малочисленной, но обладает достаточно серьезными «полномочиями».

NK-лимфоциты, количественное содержание которых в крови колеблется в пределах пяти – десяти процентов от общего числа исследуемых кровяных телец, борются с онкологическими клетками.

Организм может их активировать и при наличии у человека каких-либо аутоиммунных заболеваний.

Кроме того, в организме человека могут присутствовать атипичные лимфоциты, представленные O-клетками, лишенными необходимых для эффективной защиты рецепторов, K- и EK-клетками, имеющими специфические свойства.

В периферической крови здорового человека, не имеющего никаких проблем с самочувствием, содержится не более двух процентов от общего количества лимфоцитов, покоящихся в слоях лимфоидной ткани и в лимфатических узлах.

Они пробуждаются только тогда, когда организму требуется серьезная и незамедлительная защита, которая позволит победить атакующую болезнь.

О норме содержания клеток в крови

Активированными обычные, «спящие» лимфоциты становятся тогда, когда организм человека, подвергшегося какой-либо нежелательной атаке, индуцирует переход данных клеток из состояния в покоя в начальную стадию клеточного цикла.

В ходе активации в лимфоцитах происходят метаболические процессы и процессы созревания, отличающиеся по динамике у клеток разных групп.

После процесса активации в периферической крови человека оказываются лимфоциты, обладающие эффекторными и регуляторными функциями.

Выявить количественное содержание лимфоцитов в крови у малыша можно, сдав общий анализ крови.

Получить направление можно у своего терапевта или просто в коммерческой поликлинике сдать анализ безо всякого направления — сейчас эти услуги предоставляются без проблем.

Рассмотрев расшифровку результатов данного лабораторного исследования, можно узнать и про другие важные показатели, отражающие биохимические характеристики крови.

Если результаты, полученные после сдачи общего анализа крови, покажутся настораживающими, то юного пациента направят на прохождение дополнительных лабораторных и аппаратных исследований.

Наиболее распространенным анализом, назначаемым при значительном повышении уровня лимфоцитов в крови у детей, является исследование, называемое иммунофенотипированием лимфоцитов, содержащихся в периферической крови.

В ходе данного исследования можно определить структуры клеток, выявляя любые изменения в их форме, способные сказаться на функционале.

Если в ходе данного анализа в крови будут обнаружены клетки, называемые пролимфоцитами или лимфобластами, то больным вновь потребуются дополнительные исследования.

В отличие от организма взрослого человека, организмы детей до пятнадцати-шестнадцати лет жизни вырабатывают увеличенное количество лимфоцитов: у взрослых общее число лимфоцитов обычно не превышает сорока процентов от общей массы лейкоцитов крови, у детей данный показатель может доходить до шестидесяти процентов.

Благодаря увеличенному количеству лимфоцитов организм защищает тело ребенка от заболеваний в период формирования его иммунитета.

Если количество активированных лимфоцитов в анализе крови у ребенка превышает положенные нормы, адекватные его возрасту, то врачи могут поставить диагноз «лимфоцитоз».

Причины лимфоцитоза

Лимфоцитозом называют состояние, при котором общее содержание лимфоцитов в биологическом материале на один или несколько пунктов превосходит нормативные значения, адекватные для фактического возраста пациента.

В подавляющем большинстве случаев лимфоцитоз у взрослых и у детей является следствием реактивного ответа иммунной системы организма на появление чужеродных инфекционных, вирусных, бактериологических или иных агентов.

«Детский» и «взрослый» лимфоцитозы отличаются между собой только референтными значениями нормы, адекватной тому или иному возрасту.

Симптомы данного состояния являются смытыми и не могут достоверно указать на наличие проблемы.

Диагностировать лимфоцитоз можно, только сдав биологический материал на общий биохимический анализ крови (или на альтернативные и более углубленные лабораторные исследования).

Лимфоцитоз может быть как абсолютным, так и относительным. При абсолютном лимфоцитозе наблюдается резкое возрастание исследуемых клеток крови.

Данная ситуация в подавляющем большинстве случаев вызывается резкой реакцией организма на появившуюся проблему.

При относительном лимфоцитозе картина несколько другая: данное состояние диагностируется тогда, когда в крови у пациента изменяется удельный вес исследуемых клеток.

Существует ряд разнообразных причин, следствием которых является лимфоцитоз. Важно понимать, что данное состояние ни в коем случае не является фактором, провоцирующим появление проблем со здоровьем.

Лимфоцитоз считается специфическим ответом иммунной системы человека. Чтобы избавиться от него, следует лечить основную причину его появления.

Список наиболее распространенных причин, способных спровоцировать возникновение лимфоцитоза:

• инфекционные, бактериологические или вирусные заболевания;
• хронические заболевания селезенки;
• аллергические реакции на различные внешние раздражители.

В некоторых случаях причинами появления лимфоцитоза могут быть значительные физические нагрузки, ранее перенесенные пациентом.

Важно знать, что увеличенное количество лимфоцитов в крови может сохраняться на протяжении некоторого времени после очевидного выздоровления ребенка или взрослого человека.

Как правило, остаточный лимфоцитоз диагностируют у тех, кто в недавнем прошлом перенесли тяжелую, изнуряющую болезнь, лечение которой требует длительного реабилитационного периода.

Как готовиться к сдаче анализа крови?

К одному из более углубленных исследований крови относится анализ, проводимый с целью выявления наличия активированных лимфоцитов.

Как правило, его назначают тем пациентам, которые страдают от длительных патологических состояний, обладающих предположительно вирусным или инфекционным характером.

В некоторых случаях прохождение данного анализа требуется для выяснения точности прописанной терапии, принимаемой пациентом.

Подготовка к сдаче анализа крови – несложное, но ответственное мероприятие. Чем точнее будут соблюдаться рекомендации, озвученные врачами, тем адекватнее будет результат расшифровки лабораторного исследования.

Сдать анализ крови, в рамках которого можно определить количественное содержание лимфоцитов в крови, можно в любой частной или государственной клинике.

Обычно сбор материала для данного исследования производят утром, однако некоторые лаборатории работают и до обеда.

Готовиться к сдаче крови следует заблаговременно, за три или за четыре дня до визита в лабораторию.

На протяжении данного времени следует воздерживаться от интенсивных занятий спортом (впрочем, как и от любых других изнуряющих нагрузок).

Кроме того, данный временной срок следует использовать и чтобы очистить организм от различных лекарственных препаратов (в том случае, когда они используются).

Перед лабораторными анализами можно пить только жизненно важные лекарственные средства, обязательно рассказав врачам об их использовании.

Специфических ограничений, касающихся питания, нет. В течение времени подготовки к сдаче анализа крови есть можно любые привычные продукты.

Однако за восемь – десять часов перед предполагаемым временем сдачи биологического материала от еды следует воздержаться.

На протяжении данного временного отрезка можно пить, но не стоит употреблять жидкость в увеличенном количестве.

Обратите внимание: пить можно только кипяченую или бутилированную воду, от употребления чаев, соков и газированных минеральных вод лучше отказаться.

В современных исследовательских лабораториях расшифровку результатов данного анализа можно получить уже через несколько часов (реже – суток) с момента сдачи биологического материала.

Как правило, в государственных муниципальных поликлиниках расшифровка исследования отправляется прямо в кабинет врача, направившего пациента на исследование крови.

Существует несколько подтипов В - лимфоцитов. Основная функция В - клеток - эффекторное участие в гуморальных иммунных реакциях, дифференциация в результате антигенной стимуляции в плазматические клетки, продуцирующие антитела.

Образование В - клеток у плода происходит в печени, в дальнейшем - в костном мозге. Процесс созревания В - клеток осуществляется в две стадии - антиген - независимую и антиген - зависимую .

Антиген - независимая фаза. В - лимфоцит в процессе созревания проходит стадию пре - В - лимфоцита - активно пролиферирующей клетки, имеющей цитоплазменные H - цепи IgM. Следующая стадия - незрелый В - лимфоцит характеризуется появлением мембранного (рецепторного) IgM на поверхности. Конечная стадия антиген-независимой дифференцировки - образование зрелого В - лимфоцита , который может иметь два мембранных рецептора с одинаковой антигенной специфичностью (изотипа) - IgM и IgD. Зрелые В- лимфоциты покидают костный мозг и заселяют селезенку, лимфоузлы и другие скопления лимфоидной ткани, где их развитие задерживается до встречи со “своим” антигеном, т.е. до осуществления антиген - зависимой дифференцировки.

Антиген - зависимая дифференцировка включает активацию, пролиферацию и дифференцировку В - клеток в плазматические клетки и В - клетки памяти. Активация осуществляется различными путями, что зависит от свойств антигенов и участия других клеток (макрофагов, Т - хелперов). Большинство антигенов, индуцирующих синтез антител, для индукции иммунного ответа требуют участия Т- клеток (Т-хелперов2) - тимус - зависимые антигены . Тимус - независимые антигены (ЛПС, высокомолекулярные синтетические полимеры) способны стимулировать синтез антител без помощи Т - лимфоцитов.

В - лимфоцит с помощью своих иммуноглобулиновых рецепторов распознает и связывает антиген. Одновременно с В - клеткой антиген по представлению макрофага распознается Т- хелпером (Т- хелпером 2), который активируется и начинает синтезировать факторы роста и дифференцировки. Активированный этими факторами В - лимфоцит претерпевает ряд делений и одновременно дифференцируется в плазматические клетки, продуцирующие антитела.

Пути активации В - клеток и кооперации клеток в иммунном ответе на различные антигены и с участием популяций имеющих и не имеющих антиген Lyb5 популяций В - клеток отличаются. Активация В - лимфоцитов может осуществляться:

Т- зависимым антигеном при участии белков МНС класса 2 Т - хелпера;

Т - независимым антигеном, имеющим в составе митогенные компоненты;

Поликлональным активатором (ЛПС);

Анти - мю иммуноглобулинами;

Т - независимым антигеном, не имеющим митогенного компонента.

Кооперация клеток в иммунном ответе.

В формировании иммунного ответа включаются все основные звенья иммунной системы - системы макрофагов, Т - и В - лимфоцитов, комплемента, интерферонов и главная система гистосовместимости.

В кратком виде можно выделить следующие этапы.

1. Поглощение и процессинг антигена макрофагом.

2. Представление процессированного антигена макрофагом с помощью белка главной системы гистосовместимости класса 2 Т – хелперам 2.

3. Узнавание антигена Т - хелперами и их активация.

4. Узнавание антигена и активация В - лимфоцитов.

5. Дифференциация В - лимфоцитов в плазматические клетки, синтез антител.

6. Взаимодействие антител с антигеном, активация систем комплемента и макрофагов, интерферонов.

7. Представление при участии белков МНС класса 1 чужеродных антигенов Т- киллерам, разрушение инфицированных чужеродными антигенами клеток Т - киллерами.

8. Индукция Т - и В - клеток иммунной памяти, способных специфически распознавать антиген и участвовать во вторичном иммунном ответе (антигенстимулированные лимфоциты).

Клетки иммунной памяти. Поддержание долгоживущих и метаболически малоактивных клеток памяти, рециркулирующих в организме, является основой длительного сохранения приобретенного иммунитета. Состояние иммунной памяти обусловлено не только длительностью жизни Т - и В - клеток памяти, но и их антигенной стимуляцией. Длительное сохранение антигенов в организме обеспечивается дендритными клетками (депо антигенов) , сохраняющими их на своей поверхности.

Дендритные клетки - популяции отросчатых клеток лимфоидной ткани костномозгового (моноцитарного) генеза, представляющая антигенные пептиды Т - лимфоцитам и сохраняющая антигены на своей поверхности. К ним относятся фолликулярные отросчатые клетки лимфоузлов и селезенки, клетки Лангерханса кожи и дыхательных путей, М - клетки лимфатических фолликулов пищеварительного тракта, дендритные эпителиальные клетки тимуса.

CD антигены.

Кластерная дифференциация поверхностных молекул (антигенов) клеток, прежде всего лейкоцитов, шагает далеко вперед. К настоящему времени CD антигены - не абстрактные маркеры, а функционально значимые для клетки рецепторы, домены и детерминанты, в том числе исходно не являющиеся специфическими для лейкоцитов.

Важнейшими дифференцировочными антигенами Т - лимфоцитов человека являются следующие.

1. CD2 - антиген, характерный для Т - лимфоцитов, тимоцитов, NK клеток. Он идентичен рецептору эритроцитов барана и обеспечивает образование розеток с ними (методика определения Т - клеток).

2. CD3 - необходимы для функционирования любых Т - клеточных рецепторов (ТКР). Молекулы CD3 имеют все субклассы Т - лимфоцитов. Взаимодействие ТКР - CD3 (она состоит из 5 субъединиц) с представляющей антиген молекулой МНС класса 1 или 2 определяет характер и реализацию иммунного ответа.

3. CD4. Эти рецепторы имеют Т - хелперы 1 и 2 и Т - индукторы. Являются корецептором (местом связывания) детерминант белковых молекул МНС класса 2. Является специфическим рецептором для оболочечных белков вируса иммунодефицита человека ВИЧ - 1 (gp120) и ВИЧ - 2.

4. CD8. Популяция CD8+ Т- лимфоцитов включает цитотоксические и супрессорные клетки. При контакте с клеткой - мишенью CD8 выступает в роли корецептора для белков HLA класса 1.

Дифференцировочные рецепторы В - лимфоцитов.

На поверхности В - лимфоцитов может находиться до 150 тысяч рецепторов, среди которых описано более 40 типов с различными функциями. Среди них - рецепторы к Fc - фрагменту иммуноглобулинов, к С3 компоненту комплемента, антигенспецифические Ig рецепторы, рецепторы к различным факторам роста и дифференцировки.

Краткая характеристика методов оценки Т - и В - лимфоцитов.

Для выявления В - лимфоцитов используют метод розеткообразования с эритроцитами, обработанными антителами и комплементом (EAC - РОК), спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши, метод флюоресцирующих антител с моноклональными антителами (МКА) к рецепторам В - клеток (CD78, CD79a,b, мембранные Ig).

Для количественной оценки Т - лимфоцитов используют метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е - РОК), для выявления субпопуляций (например, Т - хелперов и Т - супрессоров) - иммунофлюоресцентный метод с МКА к CD рецепторам, для определения Т - киллеров - тесты цитотоксичности.

Функциональную активность Т - и В - клеток можно оценить в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на различные Т - и В - митогены (фитогемагглютинин - ФГА, антиген лаконоса, бактериальные липополисахариды и др.).

Сенсибилизированные Т - лимфоциты, участвующие в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) можно определить по выделению одного из цитокинов - MIF (миграцию ингибирующего фактора) в реакции торможения миграции лейкоцитов (лимфоцитов) - РТМЛ. Подробнее о методах оценки иммунной системы - в лекциях по клинической иммунологии.

Одной из особенностей иммунокомпетентных клеток, особенно Т - лимфоцитов, является способность продуцировать большое количество растворимых веществ - цитокинов (интерлейкинов) , осуществляющих регуляторные функции. Они обеспечивают согласованную работу всех систем и факторов иммунной системы, благодаря прямым и обратным связям между различными системами и субпопуляциями клеток обеспечивают устойчивую саморегуляцию иммунной системы. Цитокины участвуют также в регуляции апоптоза, в пролиферации, ангиогенезе и других клеточных процессах. Сформировались взгляды на единую цитокиновую систему , которая объединяет интерфероны, интерлейкины, колониестимулирующие факторы и другие факторы роста и имеет важное значение в обеспечении гомеостаза организма. Их определение (цитокиновый профиль) дает дополнительное представление о состоянии иммунной системы. В целом гомеостаз организма обеспечивается согласованной работой (взаимодействием) иммунной, эндокринной и нервной систем.

Цитокины секретируются различными клетками (лимфоцитами, макрофагами и др.) в процессе межклеточного взаимодействия в ответ на антигенное раздражение (инфекционный агент) и в норме направляют иммунный ответ по наиболее эффективному пути. По профилю действия цитокины можно разделить на провоспалительные и противовоспалительные , по преимущественной направленности имммунного ответа - Th1 (T - helper1 - направленные на формирование клеточно - опосредованного иммунного ответа) и Th2 (преимущественно гуморального). Баланс Th1/Th2 цитокинов на ранних этапах воспалительной реакции в значительной степени определяет преимущественно клеточный или гуморальный характер иммунного ответа.

Провоспалительные цитокины - ИЛ -1, ИЛ -6, ИЛ -8, ИЛ -12, фактор некроза опухолей (ФНО) альфа, интерфероны (ИФ) альфа и гамма синтезируются и действуют на иммунокомпетентные клетки на ранних стадиях воспаления. Взаимодействие микроорганизмов с рецепторами макрофагов приводит к индукции синтеза и секреции провоспалительных цитокинов, обеспечивающих развитие раннего воспалительного ответа.

Основной медиатор воспаления - ИЛ -1 . Клетки отвечают продукцией ИЛ -1 на действие токсинов и других компонентов микроорганизмов, активированных компонентов системы комплемента, других медиаторов воспаления. С повышением уровня ИЛ -1 сопряжены лихорадка, нейтрофилия, активация комплемента, синтез белков острой фазы воспаления, ИЛ -2, клональная пролиферация специфичных к антигену Т - клеток. Провоспалительные эффекты ИЛ -1 осуществляются в синергизме с другими цитокинами, в первую очередь с ФНО альфа и ИЛ -6.

Основными продуцентами ФНО альфа являются моноциты и тканевые макрофаги. В ранний период воспаления ФНО альфа активирует эндотелий, способствует адгезии лейкоцитов к эпителию, миграции их в очаг воспаления, индуцирует продукцию других провоспалительных цитокинов.

Противовоспалительные цитокины (ИЛ -4, ИЛ -10, ИЛ -13, ФНО бета) составляют альтернативную провоспалительным цитокинам группу, ограничивающую развитие воспаления. Существенное значение имеет ИЛ -4, уровень которого является одним из критериев оценки Th2 - ответа. ИЛ - 4 - фактор активации В - лимфоцитов, является ростовым фактором для тучных клеток, Т - клеток. ИЛ -4 синтезируется и секретируется Th2 клетками.

Th1 - цитокины - ИФ гамма, ИЛ -2 усиливают клеточно - опосредованный иммунный ответ, при котором CD8+ лимфоциты имеют значение в уничтожении клеток, инфицированных вирусами и другими внутриклеточными микроорганизмами, или имеющими другие (например, онко-) маркеры генетической чужеродности.

Th2 - цитокины (ИЛ -4, ИЛ -5, ИЛ -6, ИЛ -10, ИЛ -13) усиливают антительный иммунный ответ и обеспечивают гуморальный иммунитет преимущественно против токсинов и внеклеточных микроорганизмов.

Лекция № 14. Аллергия. ГНТ, ГЗТ. Особенности развития, методы диагностики. Иммунологическая толерантность.

Аллергические заболевания широко распространены, что связано с рядом отягощающих факторов - ухудшением экологической обстановки и широким распространением аллергенов , усилением антигенного давления на организм (в том числе - вакцинация), искусственным вскармливанием, наследственной предрасположенностью.

Аллергия (allos + ergon, в переводе - «другое действие») - состояние патологически повышенной чувствительности организма к повторному введению антигена . Антигены, вызывающие аллергические состояния, называют аллергенами . Аллергическими свойствами обладают чужеродные растительные и животные белки, а также гаптены в комплексе с белковым носителем.

Аллергические реакции - иммунопатологические реакции, связанные с высокой активностью клеточных и гуморальных факторов иммунной системы - иммунологической гиперреактивностью. Иммунные механизмы, обеспечивающие защиту организма, могут приводить к повреждению тканей, реализуясь в виде реакций гиперчувствительности.

Классификация Джелла и Кумбса выделяет 4 основных типа гиперчувствительности в зависимости от преобладающих механизмов, участвующих в их реализации.

По скорости проявления и механизму аллергические реакции можно разделить на две группы - аллергические реакции (или гиперчувствительность) немедленного типа (ГНТ) и замедленного типа (ГЗТ).

Аллергические реакции гуморального (немедленного) типа обусловлены главным образом функцией антител классов IgG и особенно IgE (реагинов). В них принимают участие тучные клетки, эозинофилы, базофилы, тромбоциты. ГНТ делят на три типа. По классификации Джелла и Кумбса к ГНТ относятся реакции гиперчувствительности 1, 2 и 3 типов, т.е. анафилактическая (атопическая), цитотоксическая и иммунных комплексов.

ГНТ характеризуется быстрым развитием после контакта с аллергеном (минуты), в ней участвуют антитела.

Тип 1. Анафилактические реакции - немедленного типа, атопические, реагиновые. Они вызываются взаимодействием поступающих извне аллергенов с антителами класса IgE, фиксированными на поверхности тучных клеток и базофилов. Реакция сопровождается активацией и дегрануляцией клеток - мишеней с высвобождением медиаторов аллергии (главным образом гистамина). Примеры реакций типа 1 - анафилактический шок, атопическая бронхиальная астма, поллиноз.

Тип 2. Цитотоксические реакции. В них участвуют цитотоксические антитела (IgM и IgG), которые связывают антиген на поверхности клеток, активируют систему комплемента и фагоцитоз, приводят к развитию антитело - зависимого клеточно - опосредованного цитолиза и повреждения тканей. Пример - аутоиммунная гемолитическая анемия.

Тип 3. Реакции иммунных комплексов. Выделяют циркулирующие иммуные комплексы «антиген - антитело» (ЦИК) и фиксированные иммунные комплексы, которые откладываются в тканях, активируют систему комплемента, привлекают к месту фиксации иммунных комплексов полиморфноядерные лейкоциты, приводят к развитию воспалительной реакции. Примеры - острый гломерулонефрит, феномен Артюса.

Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) - клеточно - опосредованная гиперчувствительность или гиперчувствительность типа 4, связанная с наличием сенсибилизированных лимфоцитов. Эффекторными клетками являются Т- клетки ГЗТ , имеющие CD4+ рецепторы в отличие от CD8+ рецепторов цитотоксических лимфоцитов. Сенсибилизацию Т - клеток ГЗТ могут вызывать агенты контактной аллергии (гаптены), антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших. Близкие механизмы в организме вызывают антигены опухолей в противоопухолевом иммунитете, генетически чужеродные антигены донора - при трансплантационном иммунитете.

Т - клетки ГЗТ распознают чужеродные антигены и секретируют гамма - интерферон и различные лимфокины, стимулируя цитотоксичность макрофагов, усиливая Т - и В - иммунный ответ, вызывая возникновение воспалительного процесса.

Исторически ГЗТ выявлялась в кожных аллергических пробах (с туберкулином - туберкулиновая проба), выявляемых через 24 - 48 часов после внутрикожного введения антигена. Развитием ГЗТ на вводимый антиген отвечают только организмы с предшествующей сенсибилизацией этим антигеном.

Классический пример инфекционной ГЗТ - образование инфекционной гранулемы (при бруцеллезе, туберкулезе, брюшном тифе и др.). Гистологически ГЗТ характеризуется инфильтрацией очага вначале нейтрофилами, затем лимфоцитами и макрофагами. Сенсибилизированные Т- клетки ГЗТ распознают гомологичные эпитопы, представленные на мембране дендритных клеток, а также секретируют медиаторы, активирующие макрофаги и привлекающие в очаг другие клетки воспаления. Активированные макрофаги и другие участвующие в ГЗТ клетки выделяют ряд биологически активных веществ, вызывающих воспаление и уничтожающих бактерии, опухолевые и другие чужеродные клетки - цитокины (ИЛ -1, ИЛ -6, альфа- фактор некроза опухолей), активные метаболиты кислорода, протеазы, лизоцим и лактоферрин.

Методы лабораторной диагностики аллергии : выявление уровня сывороточных IgE, фиксированных на базофилах и тучных клетках антител класса Е (реагинов), циркулирующих и фиксированных (тканевых) иммунных комплесов, провокационные и кожные пробы с предполагаемыми аллергенами, выявление сенсибилизированных клеток тестами in vitro - реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), цитотоксические тесты.

Иммунологическая толерантность.

Иммунологическая толерантность - специфическое подавление иммунного ответа, вызванное предварительным введением антигена . Иммунологическая толерантность как форма иммунного ответа специфична.

Толерантность может проявляться в подавлении синтеза антител и гиперчувствительности замедленного типа (специфического гуморального и клеточного ответа) или отдельных видов и типов иммунного ответа. Толерантность может быть полной (нет иммунного ответа) или частичной (существенное снижение ответа).

Если на введение антигена организм отвечает подавлением только отдельных компонентов иммунного ответа, то это - иммунологическое отклонение (расщепленная толерантность). Наиболее часто выявляется специфическая ареактивность Т- клеток (обычно Т- хелперов) при сохранении функциональной активности В - клеток.

Естественная иммунологическая толерантность - иммунологическая ареактивность к собственным антигенам (аутоиммунная толерантность) возникает в эмбриональном периоде. Она предотвращает выработку антител и Т - лимфоцитов, способных разрушать собственные ткани.

Приобретенная иммунологическая толерантность - отсутствие специфической иммунной реакции к чужеродному антигену.

Иммунологическая толерантность представляет особую форму иммунного ответа, характеризующуюся запретом, налагаемым Т - и В - супрессорами на образование клеток - эффекторов против данного, в т.ч. собственного, антигена (А.И.Коротяев, С.А.Бабичев, 1998).

В основе индуцированной иммунологической толерантности лежат различные механизмы, среди которых принято выделять центральные и периферические.

Центральные механизмы связаны с непосредственным воздействием на иммунокомпетентные клетки. Основные механизмы:

Элиминация антигеном иммунокомпетентных клеток в тимусе и костном мозге (Т - и В - клеток соответственно);

Повышение активности супрессорных Т - и В - клеток, недостаточность контрсупрессоров;

Блокада эффекторных клеток;

Дефектность презентации антигенов, дисбаланс процессов пролиферации и дифференциации, кооперации клеток в иммунном ответе.

Периферические механизмы связаны с перегрузкой (истощением) иммунной системы антигеном, пассивным введением высокоаффинных антител, действием антиидиотипических антител, блокадой рецепторов антигеном, комплексом “антиген - антитело”, антиидиопатическими антителами.

Исторически иммунологическую толерантность рассматривают как защиту против аутоиммунных заболеваний . При нарушении толерантности к собственным антигенам могут развиваться аутоиммунные реакции, в том числе возникать аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка).

Основные механизмы отмены толерантности и развития аутоиммунных реакций

1. Изменения химической структуры аутоантигенов (например - изменение нормальной структуры антигенов клеточных мембран при вирусных инфекциях, появление ожоговых антигенов).

2. Отмена толерантности на перекрестно - реагирующие антигены микроорганизмов и эпитопы аутоантигена.

3. Появление новых антигенных детерминант в результате связывания чужеродных антигенных детерминант с клетками хозяина.

4. Нарушение гистогематических барьеров.

5. Действие суперантигенов.

6. Нарушения регуляции иммунной системы (уменьшение количества или функциональная недостаточность супрессирующих лимфоцитов, экспрессия молекул МНС класса 2 на клетках, в норме их не экспрессирующих - тиреоциты при аутоиммунном тиреоидите).

Внимание! Анализ крови на лейкоцитарный ряд – важная составляющая общеклинического обследования детей и взрослых. Необходим для выявления патологических состояний различной этиологии и их своевременного лечения. Большая часть клеток лейкоцитарного ряда располагаются в различных тканевых структурах и лишь 5% – в крови.

Что такое лимфоциты и какие функции они выполняют?

Лимфоциты – клетки иммунной системы, которые обеспечивают бесперебойную защиту человеческого организма от патогенных факторов различной этиологии. При проникновении чужеродного микроорганизма или инородной частицы происходит активация и усиленная выработка лимфоцитов в органах. Большая часть лейкоцитарных агранулоцитов у детей вырабатывается в тимусе, а у взрослых – в костном мозге.

В зависимости от типа лейкоцитарных агранулоцитов различаются их основные функциональные особенности. В целом они отвечают за приобретенный иммунитет. Существует три основных вида лимфоцитов: В, Т и NK (естественные киллеры) клетки.

Важный тип лейкоцитарных агранулоцитов принято считать В-лимфоцитами, которые синтезируют пептидные соединения – иммуноглобулины. Другое название иммуноглобулинов – антитела. Они связываются с патогенным микроорганизмами и препятствуют их нормальной репродукции, высвобождению токсичных веществ. Содержание В-клеток в периферическом кровеносном русле не превышает 7-19%.

Распространенный тип лейкоцитарных агранулоцитов (до 70% в периферическом кровеносном русле) – Т-лимфоциты. Цитотоксические лимфоциты формируют базовый клеточный и гуморальный иммунный ответ. В эту группу лейкоцитарных клеток входят:

• Т-киллеры;
• Т-супрессоры;
• Т-хелперы.

Естественные киллеры распознают и убивают зараженные клетки до начала инфекции. Их содержание в кровеносном русле варьируется в широком диапазоне: от 5 до 20%. Недостаточное количество NK-клеток приводит к онкологическим заболеваниям. Организм при отсутствии естественных киллеров не может своевременно распознать раковые клетки.

Норма лимфоцитов в исследовании крови

В зависимости от возраста ребенка различаются нормальные показатели общего содержания лимфоцитов в кровеносном русле:

• Новорожденные – от 14 до 32%.
• От одной недели до одного месяца – от 21 до 48%.
• От одного до 6 месяцев – от 42 до 67%.
• До одного года – 40-62%.
• От 1 до 3 лет – 32-34%.
• До 5 лет – 30-52%.
• До 13 лет – 27-48%.

Важно! Любые отклонения в содержании лейкоцитарных агранулоцитов указывают на наличие заболеваний. Не стоит заниматься самостоятельной диагностикой или лечением ребенка. Расшифровка результатов анализов иммунофенотипирования или общего исследования крови производится квалифицированным специалистом.

Если активированные лимфоциты повышены в крови, это лимфоцитоз, а если понижены – лимфоцитопения. Оба состояния представляют угрозу здоровью ребенка. Необходимо проведение дополнительных диагностических мероприятий для выявления причины повышения или снижения числа лейкоцитарных агранулоцитов в кровеносном русле.

Почему повышаются лимфоциты у ребенка в крови?

Симптомы лимфоцитоза различаются у разных людей. У некоторых проявляется повышением температуры тела, ознобом, гипергидрозом конечностей или головокружением, а у некоторых – протекает бессимптомно. В ряде случаев такое состояние возникает из-за психоэмоционального или физического перенапряжения и не представляет угрозы здоровью детей или взрослых.

Диагностируют повышенные лимфоциты при помощи биохимического анализа крови. Различают абсолютный и относительный лимфоцитоз. Абсолютный лимфоцитоз возникает при тяжелых расстройствах – лейкозе, например. Относительное повышение лейкоцитарных агранулоцитов наблюдается при вирусных, грибковых или воспалительных реакциях. Увеличенное количество лимфоцитов в крови – это не самостоятельное расстройство, а признак, указывающий на патологию.

Распространенные причины лимфоцитоза у детей:

• Инфекционные заболевания (оспа, опоясывающий лишай, корь, малярия, вирусные поражения печени.
• Аллергия.
• Язвенный колит.
• Бронхиальная астма.
• Анемия (гемолитическая, железодефицитная).
• Расстройства эндокринной системы.
• Лейкоз (с острым или хроническим течением).
• Гиперплазия тимуса.
• Соматоформная вегетативная дисфункция.
• Гиперфункция костного мозга.

Долгое время после выздоровления ребенка наблюдается повышенное содержание лейкоцитарных агранулоцитов. В большинстве случаев лимфоцитоз такой этиологии не представляет опасности здоровью малыша. Лечение лимфоцитоза направлено на устранение основного заболевания. Народные средства, биологически активные добавки или безрецептурные лекарственные средства могут ухудшить течение основного заболевания.

Почему понижается общее содержание лимфоцитов у ребенка?

Лимфоцитопения диагностируется по общему анализу показателей крови. Существует абсолютная и относительная лимфоцитопения. При относительном снижении общего числа лейкоцитарных агранулоцитов повышается уровень гранулоцитов – нейтрофилов. Уровень нейтрофилов повышается при воспалительных или вирусных заболеваниях. Такое состояние не опасно для здоровья и проходит после выздоровления.

ВИЧ, септические заболевания, туберкулез, гангрены – причины снижения абсолютного содержания лимфоцитов в крови. Абсолютное снижение количества этих лейкоцитов свидетельствует о серьезных заболеваниях.

Другие распространенные причины понижения абсолютного количества лимфоцитов:

• Первичный иммунодефицит: болезнь Вискотта-Олдрича или комбинированный иммунодефицит.
• Серповидноклеточная или апластическая анемия.
• Лимфогранулематоз.
• Болезнь Иценко-Кушинга.
• Долгосрочная терапия гормональными препаратами.
• Депрессивное расстройство.
• Токсические или вирусные поражения печени.
• Мышечная дистрофия.
• Сердечная, почечная, печеночная или легочная недостаточность.
• Системная красная волчанка.

Длительная лимфоцитопения приводит к гибели ребенка. У детей на фоне этого состояния инфекции протекают тяжелее и длительнее. Лечение лимфоцитопении направлено на устранение заболевания, вызвавшего ее.

Как подготовиться к сдаче анализов на лейкоцитарные агранулоциты?

Неправильная подготовка к биохимическому исследованию крови приводит к ложноположительным результатам, которые осложняют диагностику. Перед забором биологического материала необходимо отказаться от пищи за двенадцать часов, а от воды – за 2 часа. Воздержаться от психоэмоционального или физического стресса, так как они могут в значительной степени исказить результаты анализов.

Перед исследованием крови нельзя принимать лекарственные препараты. Необходимо сообщить лечащему врачу о приеме биологически активных веществ, трав или безрецептурных лекарственных средств.

Место укола хорошо промыть и дезинфицировать, чтобы исключить занесение инфекции. Современные лаборатории предоставляют результаты анализов через несколько часов, реже – дней. В муниципальных клиниках показатели исследования крови отправляют к лечащему врачу пациента.

Как лечат повышенное содержание лимфоцитов в крови?

Терапия лимфоцитоза зависит от основного заболевания. При вирусных заболеваниях назначают нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, витаминные комплексы, обильное питье и постоянный отдых. С вирусными заболеваниями организм ребенка справится самостоятельно. Не рекомендуется употреблять противовирусные лекарственные средства, так как они не оказывают действия на организм ребенка. Их эффективность сопоставима с плацебо. У некоторых лекарственных средств такого типа имеются побочные эффекты, которые могут существенно повлиять на здоровье ребенка.

При бактериальных инфекциях назначают антибактериальные лекарственные средства. Если у ребенка высокая температура тела, показан прием ацетилсалициловой кислоты. Парацетамол детям употреблять крайне нежелательно из-за его гепатотоксичных свойств.

При онкологических болезнях основной упор делается на устранение новообразований. После выздоровления уровень лимфоцитов восстанавливается до исходных значений.

Как лечить лимфоцитопению?

Многое зависит от заболевания, вызвавшего снижение общего содержания лимфоцитов в крови. При врожденных патологиях костного мозга показана трансплантация стволовых клеток, прием препаратов, стимулирующих лимфоцитопоэз.

При некоторых инфекционных заболеваниях количество лимфоцитов восстанавливается после выздоровления. Поэтому необходимо соблюдать постельный режим и рекомендации лечащего врача.

Лечение основного заболевания проводится с учетом истории болезни пациента и переносимости лекарственных препаратов. Своевременная диагностика и терапия заболеваний – профилактическая мера, которая увеличивает шансы на выздоровление пациента.

Совет! Прием любых рецептурных или безрецептурных препаратов необходимо обсудить с лечащим врачом. Не следует заниматься самолечением, так как это чревато появлением непредвиденных побочных эффектов.

Активация В-лимфоцитов – ключевое событие (точнее – цепь событий) гуморального иммунного ответа. Общая схема этого процесса приведена на рисунках 38.1-1 и 38.1-2.

Рис. 38.1-1. Принципиальная схема активации В-лимфоцитов

А. В антигенпрзентирующей клетке (например, макрофаге) происходит процессинг антигена, который для сложных антигенов занимает 30-60 минут, а для менее сложных – 20-30 минут. В результате происходит ферментативная деградация антигена и его презентация на поверхности АПК в комплексе с антигенпредставляющей молекулой (как это описано выше в разделах 37.2 и 37.3).
Б. Вступивший в контакт с макрофагом нулевой (наивный) Т-хелпер активируется и додифференцируется в (в случае гуморального иммунного ответа) Т-хелпер второго типа (об активации Т-хелперов в ходе иммунного ответа был рассказано в разделе 37.4), который взаимодействует с соответствующим В-лимфоцитом.
В. В результате клон В-лимфоцита претерпевает ряд изменений, обусловленных главным образом информационными сигналами, предаваемыми ему Т-хелпером посредством цитокинов.
1. Сначала под воздействием интерлейкина-4 происходит активация В-лимфоцита.
2. Затем под воздействием интерлейкина-4 происходит пролиферация активированного В-лимфоцита (т.е. его размножение, так называемая экспансия клона).
3. И, наконец, на таких В-лимфоцитах появляется рецептор для взаимодействия с интерлейкином-6, который является сигналом дифференциации для этих клеток.
а. Под воздействием ИЛ-6 В-лимфоциты дифференцируются в плазматические клетки.
б. Однако, часть В-лимфоцитов проходит путь дифференциации не до конца. Такие не до конца дифференцированный В-лимфоциты, в отличие от плазмоцитов, являются долгоживущими клетками. При повторном контакте с причинным антигеном они заканчивают процесс дифференцировки в плазмоциты, обеспечивая более быстрый и более сильный иммунный ответ на повторный контакт с антигеном, т.е. – вторичный иммунный ответ. Благодаря этому иммунная система «запоминает» антиген, с которым ей уже приходилось «иметь дело». Такие не до конца дифференцированные В-лимфоциты называются клетками иммунологической памяти (сравните со схожими процессами при клеточном иммунном ответе, раздел 37.7.Б).
Г. Единственная задача плазматической клетки – синтез иммуноглобулинов, действие которых и составляет эффекторное звено гуморального иммунного ответа.
Д. Все виды клеток, участвующих в гуморальном иммунном ответе, находятся под контролем Т-супрессоров, способных в любой момент остановить начавшуюся иммунную реакцию (например, если она по каким-либо причинам «выйдет из-под контроля»).